海洋放线菌_药物开发的新兴资源_蔡超靖

海洋放线菌—药物开发的新兴资源

蔡超靖， 丁彦博， 单越琦， 穆云龙

（华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家工程研究中心

河北省工业微生物代谢工程技术研究中心, 石家庄 050015）

摘 要：近些年，海洋放线菌成为新药研发的重要来源，引起人们的关注，本文综述了海洋放线菌在分离方面取得的成绩，并介绍了通过传统筛选方法分离得到的生物活性代谢物，以及在与新化合物相关的基因挖掘和生物合成基因簇的异源表达方面取得的进展。

关键词：海洋放线菌； 活性代谢产物； 基因组学； 异源表达

中图分类号：R978.1 文献标识码：A 文章编号：1001-8751(2012)01-0022-08

Marine Actinomycetes －an Emerging Resource for the Drug Discovery

Cai Chao-Jing ， Ding Yan-Bo ， Shan Yue-Qi ， Mu Yun-Long

（New Drug Research & Development Center of North China Pharmaceutical Group Corporation, National Microbial Medicine Engineering & Research Center, Hebei Industrial Microbial Metabolic Engineering Research Center, Shijiazhuang 050015）

Abstract: As an important resource of the new drugs, more and more attentions were paid on marine actinomycetes recently. This review highlights achievements in the isolation of marine actinomycetes, some examples of bioactive metabolites identi ?ed by traditional screening, and presents new progress in the ?eld of genome mining leading to the discovery of novel compounds and heterologous expression of biosynthetic gene clusters.

Key words ：marine actinomycetes ； bioactive secondary metabolites ； genomics ；heterologous expression

收稿日期：2011-11-15

作者简介：蔡超靖，工程师， 研究方向：微生物来源的新药筛选。

放线菌是革兰阳性细菌，能产多种活性化合物，从20世纪50年代，人们开始研究和筛选陆生放线菌，得到许多重要的抗菌药物（两性霉素B ，红霉素，万古霉素），抗癌药物（柔红霉素，博莱霉素，丝裂霉素）和免疫抑制剂（雷帕霉素）。但近几年由于分离和筛选方法的限制，导致发现的化合物重复性高，人们转而开始研究极端生境微生物[1]，以期发现新属种与新化合物。目前已经从海洋放线菌中分离到了许多结构新颖并具有多种生物活性的化合物，因此开发海洋放线菌资源，寻找新型活性先导化合物成为

当前的研究热点[2]。1 海洋放线菌及其分离技术

海洋放线菌的分离早在1969年[3]就开始，但由于与陆生放线菌的分离方法没有太大区别，因此未得到新的属种。随着采样和分离、培养方法的改进，许多海洋固有放线菌实现分离培养，海洋环境成为新的放线菌和新天然产物的来源。Fenica 和Jensen [4]从热带太平洋海域发现了包括嗜盐产孢菌属Salinispora (MAR1类群)和海孢菌属Marinispora (MAR2类群)在内的至少13个海洋放线菌

类群，并发现了新骨架次生代谢产物，其中MAR1类群必需依赖海水才能生长，是典型的海洋固有放线菌。据Goodfellow等[5]统计，从2003年至2010年发现了50个海洋来源的放线菌属，而在海洋环境中首次描述的新属有12个：Demequina，Marisediminicola，S a l i n i b a c t e r i u m，E u z e b y a，M i n i i m o n a s，Salinispora，Iamia，Ornithinibacter，Sciscionella，Marinactinospora，Phycicola，Serinicoccus。其中一些属可代谢产生具有生物活性的新化合物，这说明海洋环境是一个巨大的生物资源库，而海洋来源放线菌的多样性也为发现新的化合物提供了可能。

分离技术对于成功培养海洋放线菌是极其重要的，首先培养基是分离培养的关键因素，在培养基中加入特定的碳、氮源可选择性的分离到较多的海洋放线菌[6]，在培养基中加入小分子信号化合物可增加可培养海洋放线菌的数量[7]，另外使用寡营养培养基并适度延长培养时间，可分离到稀有放线菌[8]，本实验室经分离发现腐殖酸-维生素培养基（HVA）在获得多样化菌株方面具有优势，并且可培养的放线菌数量也较多。同时也发现适当的盐度有助于海洋放线菌分离培养，大部分菌株在添加海水(或适量NaCl)的培养基上生长良好。嗜盐孢菌属Salinispora 和海孢菌属Marinospora就是依赖海水生长的两个海洋固有放线菌。其次分离方法也很重要，如过度稀释法[9]，噬菌体定向筛选法[10]，微囊化法[11]，分散差速离心法[12]，这些方法都可以显著提高从海洋样本中分离的放线菌数量，其中微囊化法，可分离难培养放线菌并获得大量未知菌，而分散差速离心法可以较好地处理海泥样品从而获得大量放线菌。另外，对样品进行预处理如：紫外辐射，超高频率辐射，极高频率辐射，也有助于使休眠状态的放线菌复苏， Bredholdt[13]自挪威特隆赫姆峡湾450m深处采集的海底沉积物，使用传统分离方法，只分离到链霉菌属和小单孢菌属，而经预处理后再分离可以得到11个不同的属。本实验室经微波（超高频）处理海泥样品，发现随着微波时间适度延长，可获得种类更多样的放线菌，验证了以上理论。总之对样品进行适当的预处理后，采用合适的分离方法和培养基，将提高可培养放线菌的数量与种类。

2 海洋放线菌来源的小分子化合物

最近许多文献报道了从海洋生物中分离的生物活性分子[4-5,14-15]，但从Mayer等[15]的数据中发现海洋天然产物中只有少数来自于放线菌，这可能是因为这些年对海洋药物的研究主要集中在海绵，被囊动物，珊瑚，海藻上。事实上，分离自海洋动物的活性化合物可能是由共生菌合成的[16]，目前已将研究重点转向分离这种菌并进行可持续培养。现已从海洋放线菌中分离到一些具有生物活性的化合物，见表1。

2.1生物碱类

Salinosporamide A(marizomib，图1)是海洋放线菌次生代谢产物在药物研发方面成功的例子，该化合物是从砂嗜盐产孢菌Salinispora arenicola[17]中分离的生物碱类蛋白酶体抑制剂，它与20S蛋白酶体亚基的催化核心发生不可逆结合，并对其抑制，从而破坏细胞增殖，诱导细胞凋亡，抑制肿瘤和血管新生，具有较强的细胞毒选择活性。Salinosporamide A 由Nereus公司研发，目前正用于治疗晚期恶性实体瘤患者的I期临床试验。

Diazepinomicin（图1）是一种从海洋小单孢菌中分离的新型生物碱类抗生素，它与外周苯并二嗪受体结合，同时阻断RAS/MAP激酶通路[18]，诱导细胞凋亡，对癌细胞有显著的抑制作用。目前，Thallion制药公司对其进行早期的临床调查发现Diazepinomicin可用于治疗晚期癌症。

Staurosporine(星型孢菌素，图1)是从海洋链霉菌Streptomyces roseoflavus分离得到的吲哚咔唑类生物碱，具有抗肿瘤、抑制蛋白激酶C、抗血小板凝聚、阻滞细胞周期等多种生物活性[19]。

2.2 聚酮类

A b y s s o m i c i n C（图2）是从海洋疣孢菌Verrucosispora maris分离得到的多环聚酮类化合物，是所发现的第一个天然的氨苯甲酸（PABA）的抑制剂，它通过抑制菌体内PABA的生物合成来抑制嘌呤前体-四氢叶酸的生物合成，从而达到抑菌目的，这是一种针对新抑菌靶点的抗生素。它对耐甲氧西林金葡球菌（MRSA）具有抗菌活性，最新数据显示abyssomicin可用于治疗结核病，因为它对结核杆菌具有强有力的抑制作用[20]。

Saliniketal A和Saliniketal B（图2）是从海洋砂嗜盐产孢菌[21]中分离得到的两个结构新颖的聚酮类化合物，结构与利福霉素相似，可抑制癌细胞增殖，用于防治癌症。

2.3肽类

表1分离自海洋放线菌一些生物活性天然产物

T able 1 Some natural products with biological activity isolated from marine actinomycetes

化合物生物活性分离株

Ammosamides细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Antiprotealide抗肿瘤热带嗜盐产孢菌Salinispora tropica

2-Allyloxyphenol抗细菌,抗氧化链霉菌属Streptomyces sp.

Albidopyrone细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Arenamides抗肿瘤砂嗜盐产孢菌Salinispora arenicola Aureoverticillactam细胞毒活性金黄垂直链霉菌Streptomyces aureoverticillatus Ayamycin抗细菌诺卡氏菌属Nocardia sp.

Carboxamycin 抗细菌, 细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Cyclomarines抗炎链霉菌属Streptomyces sp.,

砂嗜盐产孢菌Salinispora arenicola

Daryamide C抗肿瘤链霉菌属Streptomyces sp.

Dermacozines细胞毒活性,清除自由基活性皮球菌属Dermacoccus sp.

Enterocin抑菌活性海洋链霉菌Streptomyces maritimus

Essramycin抗细菌链霉菌属Streptomyces sp.

γ-Indomycinone抗肿瘤链霉菌属Streptomyces sp.

Indoxamycins细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Lipoxazolidinones抗细菌海孢菌属Marinispora sp.

Lodopyridone细胞毒活性糖单胞菌属Saccharomonospora sp.

Lynamicins 抗细菌海孢菌属Marinispora sp.

Mansouramycins 细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Marinisporolides抗真菌海孢菌属Marinispora sp.

Marinopyrroles 抗细菌, 细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Naseseazines抗肿瘤链霉菌属Streptomyces sp.

Proximicins细胞毒活性疣孢菌属V errucosispora sp.

Resisto? avine抗肿瘤, 抗细菌链霉菌属Streptomyces sp.

Salinamides抗炎链霉菌属Streptomyces sp.

Salinipyrone A抗炎太平洋嗜盐产孢菌Salinispora paci? ca Salinisporamycin 抗细菌砂嗜盐产孢菌Salinispora arenicola

Splenocins抗炎链霉菌属Streptomyces sp.

Streptokordin细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Tartrolon D细胞毒活性链霉菌属Streptomyces sp.

Tirandamycins抗细菌链霉菌属Streptomyces sp.

Violacein抗原虫假单胞菌属Pseudomonas sp.

噻可拉林（Thiocoraline，图3）是环硫代缩酚酸肽类的酶抑制剂，由海洋小单孢菌代谢产生[22]。该化合物具有独特的作用机制，通过抑制DNA聚合酶α，导致细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡，具有很强的抑制肿瘤的作用。Thiocoraline 的系列衍生物目前正由PharmaMar制药公司进行临床前实验。

Lucentamycins A-D（图3）是分离自海洋拟诺卡氏菌Nocardiopsis lucentensis的四种新型肽类化合物，其中Lucentamycins A和B显示了比C、D更强的细胞毒活性，可用作抗肿瘤药物。结构显示仅Lucentamycins A和B含有苯环和吲哚环, 这表明芳

香环可能是这类抗肿瘤活性物质的重要官能团[23]。Piperazimycins是从海底链霉菌中得到的环状六元缩肽，具有选择性抗肿瘤活性，尤其对黑色素瘤细胞，中枢神经瘤细胞的毒性较强[24]。

2.4大环内酯类

Marinomycins A-D是由海孢菌Marinispora sp.代谢产生的一系列抗肿瘤抗生素,是新颖的大环内酯类化合物。Marinomycins A（图4）对MRSA有较强的抗菌活性，而且对黑色素瘤细胞株有显著的抑制选择性，MarinomycinB-C（图4）同样具有较强的细胞毒活性和抗菌活性[25]。但这类化合物结构互变很快，增加了对他们进行进一步药用研究的难度。

Sporolide A和Siporolde B（图4）是从海洋固有放线菌热带嗜盐产孢菌Salinispora tropica中分离得到的新颖的11元大环内酯类化合物,其中Sporolide A含有氯元素[26]。Chalcomycin C和Chalcomycin D （图4）也是从海洋链霉菌中分离得到的大环内酯类化合物，抑菌活性较弱，但具有较强的细胞毒活性[27]。分离自海洋灰色链霉菌Streptomyces griseus 的Aplasmomycins A-C（图4）是结构独特的含硼元素的32元内酯化合物[28-29]，能抑制包括分支杆菌在内的革兰阳性细菌，另外还具有抗疟原虫活性。Maduralide（图3）是从海洋来源放线菌Actinomycet ales分离到的较罕见的24元大环内酯类化合物，具有较弱的抗菌活性[30]。

海洋放线菌来源的化合物具有结构及生物活性多样的特点，包含了许多新骨架化合物，这与海洋放线菌的多样性，以及海洋生境的特殊性有关。同时发现海洋放线菌来源的活性化合物大多分离自链霉菌属 (见表1)。这反映了海洋链霉菌很有可能象陆生链霉菌一样，更易于培养和诱导合成代谢产物。

3 可持续生产海洋天然产物的基因组学方法

在对海洋放线菌Salinispora tropica基因组序列全面分析的基础上，人们对其生物潜力已全面了解。Udwary等[31]分析了Sal. tropica基因组（包含5.18Mbp碱基），鉴定了17个与代谢物合成有关的基因簇，后来Penn[32]于2009年更新为19个。此外本属的另一个种Salinispora arenicola也完成了全基因

图1海洋放线菌来源的生物碱类化合物

Figure1 Alkaloid compounds from marine actinomycetes

图2海洋放线菌来源的聚酮类化合物

Figure 2Polyketide compounds from marine actinomycetes

组测序，通过对Sal. tropica 和Sal. arenicola 的基因组序列进行比较，发现Sal. arenicola 至少含有30个次生代谢合成反应的基因簇，其中12个在Sal. Tropica 中有旁系同源物，而其他18个为该种所特有。菌株Sal. arenicola 产生星孢菌素（staurosporine ）和环肽（cyclomarine ），而菌株Sal. tropica 产生salinosporamide ，sporolide 和 salinilactam ，可见两者代谢产物截然不同，但是这两个菌株16S rRNA 基因序列相似性却超过99%，这说明了16S rRNA 基因序列数据并不是快速鉴别已知化合物的关键指标。同时也说明了放线菌的不同种往往与不同的天然产物相关联，海洋来源放线菌中一些经鉴定为新属种的微生物菌株将成为新天然产物的重要来源。

尽管海洋放线菌生产次生代谢产物的遗传潜力很大，但实际上只有极少数菌株可以在实验室条件下实现其次生代谢产物的生产，考虑到我们对海洋

图3 海洋放线菌来源的肽类化合物

Figure 3 Peptide compounds from marine actinomycetes

放线菌生理机能还不甚了解，近期无法实现其工业化大生产。最直接的方法是将海洋次生代谢产物的基因簇转化到已知工程细菌中进行异源表达，目前已有相当多成功案例。

抗生素生物合成基因簇异源表达成功的例子最早可追溯到1987年，Hopwood 等[33]从天蓝色链霉菌S.coelicolor 克隆了放线紫红素基因簇，并在链霉菌S. parvulus 中实现了异源表达。虽然链霉菌具有较好的可持续生产多种外源代谢产物的能力，但普通的链霉菌由于内部存在大量固有的次生代谢产物的基因簇，干扰外源基因簇的合成路径，造成非目的产物分流和前体消耗。目前已通过构建工程菌，删除其内源干扰路径，作为宿主对来自其他放线菌的外源基因簇进行异源表达，解决了这一难题。其中比较成功的工程菌是一个阿维链霉菌S. avermitilis 的突变株，该菌株中许多内源表达基因簇缺失[34]，成为基

图4海洋放线菌来源的大环内酯类化合物

Figure4 Macrolide compounds from marine actinomycetes

因组最小化的工程菌。三种不同的外源基因簇在该工程菌中进行表达，其中两种基因簇表达的化合物产量都高于在原菌株中产量，而第三种基因是在可变启动子控制下，于合成路径中引入调节基因，从而激活放线菌（包括海洋放线菌）中沉默的生物合成基因簇[35]，使目的产物实现表达。对于海洋放线菌中较难进行异源表达的沉默基因簇可参照第三种基因的表达方法，从而实现目的产物的异源生产。

海洋放线菌异源表达有了不少成功的案例：海洋来源的小单孢菌Micromonospora sp.ACM2-092和Micromonospora sp.ML1的Thiocoraline基因簇在生物工程菌白色链霉菌S. albus 和变铅青链霉菌S. lividan 中进行异源表达，成功产生了Thiocoraline[36]；海洋链霉菌Streptomyces sp. CNQ-525的napyradiomycin生物合成基因簇在工程菌S. albus中异源表达，产生了napyradiomycins系列[37]。

目前虽然一些海洋放线菌的天然产物已实现异源生产，可是也面临一些问题如许多稀有放线菌生长缓慢，通过常规的原生质体转化，种间结合进行基因转移困难, 有待我们进一步研究解决。

4 展望

海洋放线菌具有合成多种化合物的潜力，海洋生物来源的天然产物引起了人们的极大兴趣，现在已有许多抗肿瘤疗效高、毒性低的海洋放线菌天然产物及其结构改造化合物进入临床试验阶段。因此，国家对海洋放线菌研究也很重视，建立了海洋微生物菌种保藏中心。我们实验室也开展了部分海洋放线菌的分离工作，希望可以通过定向筛选获得一部分结构新颖的、有价值的化合物。我们仍需继续构建异源表达的工程菌，并将分子生物学知识与实验相结合，摸索合适的表达条件，使大多数海洋放线菌的天然产物实现异源生产；逐步建立和完善海洋放线菌菌种库,开展稀有放线菌的分离及生物活性研究；并通过建立新的活性筛选模型，不断挖掘化合物的生物活性，为进行海洋放线菌来源的新药研发提供条件。

参 考 文 献

Podar M, Reysenbach A L. New opportunities revealed by [1]

biotechnological explorations of extremophiles[J]. Current Opinion in Biotechnology, 2006, 17(3): 250

李巧连,李可,谢明杰,等.海洋放线菌次级代谢产物及其[2]

活性研究进展[J]. 中国海洋药物杂志, 2010, 29(5): 57

Weyland H. Actinomycetes in North Sea and Atlantic Ocean [3]

sediments[J]. Nature, 1969, 223(5208): 858

Fenical W, Jensen P R. Developing a new resource for [4]

drug discovery: marine actinomycete bacteria[J]. Nature Chemical Biology, 2006, 2(12): 666

Goodfellow M, Fiedler H P. A guide to successful [5]

bioprospecting: informed by actinobacterial systematics[J].

Antonie Van Leeuwenhoek , 2010, 98(2): 119

王宏梅,赵心清

[6] . Progress in the bio-diversity studies of

culturable marine actinobacteria[J].微生物学通报, 2007, 34

(5): 996

Bruns A, Cypionka H, Overmann J. Cyclic AMP and acyl [7]

homoserine lactones increase the cultivation efficiency of heterotrophic bacteria from thecentral Baltic Sea[J]. Applied and Environment Microbiology, 2002, 68 (8): 3978

Mincer TJ, Jensen PR, Kauffman CA, et al. Widespread and [8]

persistent populations of a major new marine actinomycet taxon in ocean sediments[J]. Applied and Environment Microbiology, 2002, 68 (10): 5005

Gontang E A, Fenical W, Jensen P R. Phylogenetic diversity [9]

of gram-positive bacteria cultured from marine sediments[J].

Applied and Environment Microbiology, 2007, 73(10): 3272 Bouvier T, del Giorgio PA. Key role of selective viral-[10]

induced mortality in determining marine bacterial community composition[J]. Environmental Microbiology, 2007, 9(2): 287

Zengler K, Toledo G, Rappe M, et al. Cultivating the [11]

uncultured[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2002, 99(24): 15681

Maldonado LA, Stach JE, Pathom-aree W, et al. Diversity [12]

of cultivable actinobacteria in geographically widespread marine sediments[J]. Antonie Van Leeuwenhoek, 2005, 87(1): 11

Bredholdt H, Galatenko OA, Engelhardt K, et al. Rare [13]

actinomycete bacteria from the shallow water sediments of the Trondheim fjord, Norway: isolation, diversity and biological activity[J].Environmental Microbiology, 2007, 9(11): 2756

Bull AT, Stach JE. Marine actinobacteria: new opportunities [14]

for natural product search and discovery[J]. Trends in Microbiology, 2007,15(11): 491

Mayer AM, Rodríguez AD, Berlinck RG, et al. Marine [15]

pharmacology in 2007?8: marine compounds with antibacterial, anticoagulant, antifungal, anti-inflammatory, antimalarial, antiprotozoal, antituberculosis, and antiviral activities; affecting the immune and nervous system, and other miscellaneous mechanisms of action[J]. Comparative Biochemistry & Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology, 2011, 153(2): 191

K?nig GM, Kehraus S, Seibert SF, et al. Natural products [16]

from marine organisms and their associated microbes[J].

Chembiochem, 2006, 7(2): 229

Feling RH, Buchanan GO, Mincer TJ, et al. Salinosporamide [17]

A: a highly cytotoxic proteasome inhibitor from a novel microbial source, a marine bacterium of the new genus Salinospora[J]. Angewandte Chemie International Edition , 2003, 42(3): 355

Gourdeau H, McAlpine JB, Ranger M, et al. Identi? cation, [18]

characterization and potent antitumor activity of ECO-4601,

a novel peripheral benzodiazepine receptor ligand[J]. Cancer

Chemotherapy and Pharmacology, 2008, 61(6): 911

Hu JC, Ju JH, Wang N, et al. Staurosporine produced by [19]

marine-derived actinomycete Streptomyces roseo? avus [J].

Journal of Biotechnology, 2008, 136: S585

Bister B, Bischoff D, Str?bele M, et al. Abyssomicin C-A [20]

polycyclic antibiotic from a marine Verrucosispora strain as an inhibitor of the p-aminobenzoic acid/tetrahydrofolate biosynthesis pathway[J]. Angewandte Chemie International Edition, 2004, 43(19): 2574

William PG ,Asolkar RN ,Kondratyuk T, et al. Saliniketals

[21]

A and B,bicyclic polyketides from the marine actinomycete

Salinispora arenicola[J]. Journal of Natural Products, 2007, 70(1): 83

PerezBaz J, Canedo LM, FernándezPuentes JL, et al.

[22]

Thiocoraline, a novel depsipeptide with antitumor activity produced by a marine Micromonospora. II. Physico-chemical properties and structure determination[J]. The Journal of Antibiotics, 1997, 50(9): 738

Cho JY, Williams PG, J ensen PR , et al. LucentamycinsA-D, [23]

cytotoxic peptides from the marine-derived actinomycete Nocardiopsis lucentensis [J ]. J Natural Products, 2007, 70

(8) : 1321

Miller ED, Kauffman CA , Jensen PR, et al.

[24] Piperazimycins

cytotoxic hexadepsipeptides from a marine derived

bacterium of the genus Streptomyces[J]. J Org Chem,2007,72

(2): 323

Kwonhc HC, Kauffman CA, Jensen PR, et al. Marinomycins [25]

A-D antitumour antibiotics of a new structure class from

a marine actinomycete of the recently discovered genus

“Marinispora”[J]. J American Chemical Society, 2006, 128(5): 1622.

Buchanan GO, Williams PG, Feling RH, et al. Sporolides A [26]

and B: Structurally unprecedented halogenated macrolides from the marine actinomycete Salinispora tropica[J].

Organic Letters, 2005, 7(13): 2731

丁玲. 八株海洋微生物次级代谢产物的研究[D]. 青[27]

岛：中国科学院研究生院（海洋研究所），2008.

Nakamura H, Iitaka Y, Kitahara T, et al. Structure of [28]

aplasmomycin[J]. J Antibiotics, 1977, 30 (9) : 714

袁干军,洪葵,林海鹏.

[29] 海洋放线菌次级代谢产物中大环

内酯化合物的研究进展[J].中国海洋药物杂志,2010, 29(5): 57

Pathirana C, Tapiolas D, Jensen PR, et al. Structure [30]

determination of maduralide : a new 24-membered ring macrolide glycoside produced by a marine bacterium (actinomycetales)[J]. Tetrahedron Letters, 1991, 32(21): 2323

Udwary DW, Zeigler L, Asolkar RN, et al. Genome sequencing [31]

reveals complex secondary metabolome in the marine actinomycete Salinispora tropica[J]. Proceedings National Academy of Sciences, 2007, 104(25): 10376

Penn K, Jenkins C, Nett M, et al. Genomic islands link [32]

secondary metabolism to functional adaptation in marine Actinobacteria[J]. ISME J, 2009, 3(10):1193

Malpartida F, Hopwood DA. Molecular cloning of the whole [33]

biosynthetic pathway of a Streptomyces antibiotic and its expression in a heterologous host[J]. Nature, 1984, 309(5967): 462

Komatsu M, Uchiyama T, Omura S, et al. Genome-minimized [34]

Streptomyces host for the heterologous expression of secondary metabolism[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107(6): 2646

Bunet R, Song L, Mendes MV, et al. Characterization and [35]

manipulation of the pathway-specific late regulator AlpW reveals Streptomyces ambofaciens as a new producer of

（下接第42页）

骨折疗效比较[J].实用医院临床杂志,2011,8(5):78周骏武,匡文忠,胡召云,等.动力髋螺钉钢板系统和股骨近

[6] 端锁定钢板治疗股骨粗隆间骨折的疗效观察[J].安徽医药,2011,15(8):1001

林俊涛,周正开,伍红平,等.动力髋螺钉治疗股骨转子间骨

[7] 折[J].安徽医学,2011,32(1):70

赵刚,韩慧英,李守勇.动力髋螺钉治疗股骨转子间骨折中

[8] 进钉点问题[J].临床骨科杂志,2006,9(1):283

Antimicrob Agents Chemother, 2011, 55(2)593

Wei ZQ, Du XX, Yu YS, et al. Plasmid-mediated KPC-2 in

[16] a Klebsiella pneumoniae isolate from China[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2007, 51(2):763

冯雅君, 沈萍, 杜小幸, 等. 产碳青霉烯酶KPC-2肺炎克雷

[17] 伯菌局部流行[J]. 浙江医学, 2008, 30(9):923

王凤霞, 胡志东. 产新德里金属β-内酰胺酶型细菌的研

[18] 究进展[J]. 国际流行病学传染病学杂志, 2011, 38(2):128高山, 普珍. 肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类抗生素耐药机制

[19] 的研究[J]. 华西药学杂志, 2006, 21(1): 021

Yang D, Guo Y , Zhang Z. Combined porin loss and extended

[20] specrtum beta-lactamase production is associated with an increasing imipenem minimal inhibitory concentration in

clinical Klbsiella pneumoniae strains[J]. Curr Microbiol, 2009, 58(4): 366

张嵘, 蔡加昌, 周宏伟, 等. β-内酰胺酶合并OmpK36膜孔

[21] 蛋白缺失引起肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2008, 28(1): 44Yang D, Zhang Z. Biofilm-forming [22] Klebsiella pneumoniae

strains have greater likelihood of producing extended spectrum beta-lactamases[J]. J Hosp Infect,2008, 8(4):369

Padilla E, Llobet E, Domenech-Sanchez A,et al.

[23] Klebsiella pneumoniae AcrAB efflux pump contributes to antimicrobial resistance and virulence[J]. Antimicrob Agents Chemother,2010, 54(1):177

kinamycins[J]. J Bacteriology, 2010, 193(5): 1142

Lombó F, Velasco A, Castro A, et al. Deciphering the

[36] biosynthesis pathway of the antitumor thiocoraline from a marine actinomycete and its expression in two Streptomyces species[J]. Chembiochem, 2006, 7(2): 366

Winter JM, Mof ?

tt MC, Zazopoulos E. et al. Molecular basis [37] for chloronium-mediated meroterpene cyclization: cloning, sequencing, and heterologous expression of the napyradiomycin biosynthetic gene cluster[J]. J Biological Chemistry, 2007,

282(22): 16362

（上接第5页）

（上接第29页）