人羊膜间充质干细胞分离培养：胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择

人羊膜间充质干细胞分离培养：胰蛋白酶及胶原酶消化时间及

浓度的选择

张惠娟;丛姗;梁美萍;刘俊平;黄利刚;宋瑾;曹贵方

【摘要】背景：文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致，得到的细胞数

量各不相同。目的：探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。
方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，分别通过4个实验7

种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一：分别采用3种方法：0.05 g/L

胰蛋白酶消化10 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min；0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min；0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。

②实验二：采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验三：分别采用2种方法：0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化

30 min后，再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min；0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四：采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后，再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态，研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。
结果与结论：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min，

然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是最合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形，胞质丰富，细胞核呈圆形，1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适，而且胶原酶的浓度合适，得到的细胞数量最

多。%BACKGROUND:Extraction methods of human amniotic mesenchymal stem cells are inconsistent in the number of cells.
OBJECTIVE:To explore the optimal method to in vitro isolate and culture human amniotic mesenchymal stem cells.
METHODS:Under sterile conditions, ful-

term cesarean fetal amniotic membrane was cut into pieces, then to isolate human amniotic mesenchymal stem cells by seven methods in four experiments. In experiment 1, human amniotic mesenchymal stem cells were isolated by the fol owing three methods:(1) 0.05 g/L trypsin digestion for 10 minutes fol owed by 0.75 g/L col agenase digestion for 60 minutes;(2) 0.75 g/L col agenase I for 120 minutes;(3) co-digestion with 0.05 g/L trypsin and 0.75 g/L col agenase for 60 minutes. In experiment 2, the samples were digested with 0.05 g/L trypsin digestion for 30 minutes fol owed by 0.75 g/L col agenase digestion for 30 minutes. In experiment 3, the samples were digested by two methods:(1) 0.05 g/L trypsin digestion for 30 minutes×2, fol owed by 0.75 g/L col agenase digestion for 60 minutes;(2) 0.05 g/L trypsin digestion for 40 minutes×2, fol owed by 0.75

g/L col agenase digestion for 60 minutes. In experiment 4, the samples were digested with 0.05 g/L trypsin digestion for 30 minutes×2, fol owed by 1 g/L col agenase digestion for 60 minutes. Fol

owing morphology observation under a microscope, we studied the most suitable method for isolating human amniotic mesenchymal stem cells.
RESULTS AND CONCLUSION:Digestion with 0.05 g/L trypsin for 30 minutes twice fol owed by 1 g/L of col agenase digestion of 60 minutes was the most suitable isolation and culture condition in vitro. cells became elongated fusiform or star-shaped with rich cytoplasm, and nuclei were round with 1-3 nuts. We can harvest the most number of human amniotic mesenchymal stem cells using the method described in experiment 4.

【期刊名称】《中国组织工程研究》

【年(卷),期】2014(000)006

【总页数】6页(P944-949)

【关键词】干细胞;培养;间充质干细胞;羊膜间充质干细胞;细胞培养;胰蛋白酶;胶原酶;863项目

【作者】张惠娟;丛姗;梁美萍;刘俊平;黄利刚;宋瑾;曹贵方

【作者单位】内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018;内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018;内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018;内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018;内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018;内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018;内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室，内蒙古自治区呼和浩特市 010018

【正文语种】中文

【中图分类】R394.2

0 引言 Introduction

干细胞是一种能够自我更新且未分化的细胞，在一定的条件下，干细胞能够分化成为多种成熟细胞类型。按照来源和分化潜能不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞两类[1]。胚胎干细胞来源于早期的胚泡和胚胎内层的细胞群，并且具有向3个胚层细胞分化的能力[2-3]，但其伦理学争议严重影响并制约了临床应用研究

进展。成体干细胞形成于原肠胚形成后的胎儿和成体组织，传统的观念认为，成体干细胞主要分化为其来源组织的细胞类型。然而，近几年来的很多研究表明，成体干细胞具有能够分化成为除来源以外的其他胚层组织的能力，为临床应用这种多潜能细胞，治疗多种疾病带来了新的希望[4]。

间充质干细胞又称为基质干细胞，是属于成体干细胞的一种，最早从骨髓中分离而来。这种细胞具备干细胞定义的两个基本特性：①能够自我更新。②可分化成两个或两个以上其他品系的细胞。

间充质干细胞是由早期中胚层发育而来的非造血成体干细胞，该细胞在体外可以贴壁生长，并呈现梭状[5]。胞质丰富，细胞核呈圆形，1-3个核仁[6]。在适当的条件下可以大量扩增，并转化为间充质祖细胞，进而分化成各种组织细胞，如脂肪、骨、软骨、内皮细胞、成纤维细胞等。

间充质干细胞除了具有多系分化的功能之外，还具有低免疫原性、能向肿瘤迁移、具有免疫调节等功能，使其除了在治疗组织缺损、器官退行性疾病取得了重要进展以外，在肿瘤及免疫疾病治疗中也具有相当广泛的应用前景。此外，一些研究学者还发现，基质干细胞具有类似免疫抑制剂作用，可抑制T淋巴细胞在混合淋巴细胞中的免疫反应，并同时抑制T细胞的异基因增殖反应。

据国外的一些临床试验和动物实验都己基本证实，成体干细胞有两个引人注意的生物学特性：一是成体干细胞注入体内后，有明显的趋向性，较明显集中到受损伤的部位；二是成体干细胞到达受损的部位后，在局部的微环境诱导，发生了明显的诱导分化，使成体干细胞向着已损伤组织修复所需要的细胞，进行了导向性的分化。所以，近年来间充质干细胞已逐步成为干细胞研究的热点。

目前虽然骨髓仍作为是间充质干细胞的主要来源，但骨髓提取间充质干细胞为一个侵入性的过程，并且干细胞的质量和数量都随着供者年龄的增长而逐渐降低[7]。其他组织中，如动员的外周血、乳牙、脐带、脐血也存在间充质干细胞，然而，从

这些组织中获得的细胞数量较为有限。所以，寻找更易获得、含量丰富并且易于培养的间充质干细胞新来源，对间充质干细胞的实验研究及临床应用，都具有重大意义。以上因素，都限制了间充质干细胞在组织工程和临床中的运用。

羊膜是胎膜最内层，是由人羊膜间充质细胞和人羊膜上皮细胞组成，由胚胎羊膜囊壁发育而成，薄而透明，人羊膜间充质细胞来源于胚胎中胚层，而人羊膜上皮细胞来源于胚胎外胚层。越来越多的研究已证实，人羊膜间充质细胞和人羊膜上皮细

胞都具有干细胞的特征，羊膜在胎盘面与绒毛膜相贴，胎盘不只在胚胎的发育、营养、耐受力方面发挥作用，而且还具备一种潜在的干细胞能力。当在母体内时，胚外中胚层来源的间充质干细胞不断的分化，成为由结缔组织形成的血管，而胚胎借此完成与母体的物质交换。胎盘在胎儿分娩出生后就完成使命成为“废弃物”，在胎儿出生后常被丢弃。In’t Anker等[8]从羊膜培养、扩增出间充质干细胞，并经诱导分化，表达了脂肪细胞和软骨细胞的表型，证实了其干细胞特性。羊膜来源广泛，取材方便，且无伦理学限制，与其他间充质干细胞来源组织而言，具有无可比拟的优越性[9]。但是迄今为止，对于胎盘及脐带来源的间充质干细胞的生物学特性，尚无较为深入的研究。

间充质干细胞是细胞治疗和基因治疗的较为理想的细胞，但间充质干细胞的培养非常困难，目前主要依靠原代培养。提高原代培养的成功率依赖于精确的取材方法和有效的体外扩增技术[5]。胎盘组织作为寻找人类间充质干细胞的新来源，已成为

人们关注的研究热点。从胎盘组织中分离羊膜、培养细胞，因其来源广泛、不受伦理限制等优越性而具有广阔的应用前景。因此，对羊膜间充质干细胞的分离培养方法具有重要意义，可为将来细胞分化能力的研究及细胞移植应用奠定基础[10-26]。所以通过用不同的酶消化法，探讨人羊膜间充质干细胞分离与培养的最合适条件，并为下一步试验提供重要的依据。

1 材料和方法 Materials and methods

设计：对比观察细胞学实验。

时间及地点：实验于2013年3至6月在内蒙古农业大学兽医学院完成。

材料：

羊膜：经产妇知情、同意，无菌采集健康足月剖宫产羊膜，冰盒中2 h内运达实验室进入试验流程。

实验方法：

样品的前处理：无菌条件下取剖宫术的胎膜组织，采用机械分离法将羊膜从胎盘组织上剥离，置于含有双抗(青霉素和链霉素)的PBS中反复洗涤，以清除残留血迹，将洗涤好的羊膜用眼科剪剪成碎片。

方法的探究：根据相关文献，初步确定间充质细胞培养的浓度与时间，然后再通过改变培养的时间和浓度探索出培养间充质干细胞的最适合条件。

实验一：

方法一：取前处理的样品在37 ℃下，根据相关文献，用0.05 g/L的胰蛋白酶消

化10 min，用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后

200目细胞筛过滤，筛中组织经PBS冲洗后装入培养皿中，然后加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃下消化60 min，之后用含体积分数5%的胎牛血清DMEM

终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中

离心5 min，去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中培养。即0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。

方法二：取前处理的样品在37 ℃下，改变消化的方法，用0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃下消化2 h，之后用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中离心5 min，

去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中：培养。即0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min。

方法三：取前处理的样品在37 ℃下，改变消化方法，用0.05 g/L的胰蛋白酶和0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶混合后，在37 ℃下消化60 min，之后用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中离心5 min，去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中培养。即0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。

实验二：

方法：取前处理的样品在37 ℃下，根据相关文献，用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min，用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，筛中组织经PBS冲洗后装入培养皿中，然后加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃下消化30 min，之后用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中离心5 min，去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中培养。即0.05 g/L的胰酶消化30 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。

实验三：在确定实验二是目前最后的条件后继续在原有基础上探究方法。

方法一：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min，用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，筛中组织经PBS冲洗后装入培养皿中，然后加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃下消化60 min，之后用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中离心5 min，去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中培

养。即0.05 g/L的胰蛋白酶连续两次消化30 min后，再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。

方法二：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min，用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，筛中组织经PBS冲

洗后装入培养皿中，然后加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃下消化60 min，之后用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中离心5 min，去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中培养。即0.05 g/L的胰酶连续2次消化40 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化

60 min。

实验四：在确定实验三中方法二是目前最合适的条件下设立第4个实验组。

图1 实验一、二、三不同方法体外培养人羊膜间充质干细胞的结果(×10)Figure 1 Three methods for isolation and culture of human amniotic mesenchymal stem cells in experiments 1-3 (×10)图注：(1)图中A1-3为实验一。①图中A1

采用0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化 60 min人羊膜

间充质干细胞接种3 d后，细胞呈圆形，折光性比较弱，细胞数量较少。②图中

A2为采用0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min人羊膜间充质干细胞接种3 d后，细胞虽然数量较多，但细胞形态不好，混有其他种类细胞。③图中A3为采用

0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min人羊膜间充质干细胞接

种3 d后，细胞数量较多，但细胞形态不好，混有其他种类细胞。(2)图中B为实

验二。采用0.05 g/L的胰酶消化30 min后再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min

人羊膜间充质干细胞接种3 d细胞形态较好，呈圆形，折光性较好，但细胞数量

较少。(3)图中C1，2为实验三。①图中C1为采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min人羊膜间充质干细胞接

种3 d后，细胞形态较好，呈圆形，折光性较好，细胞数量较多。②图中C2为采用0.05 g/L的胰酶连续2次消化40 min后再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min

人羊膜间充质干细胞接种3 d后，细胞形态较好，呈圆形，折光性好，细胞数量多。

方法：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min，用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，筛中组织经PBS冲洗

后装入培养皿中，然后加入1 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃下消化60 min，之后

用含体积分数5%的胎牛血清DMEM终止消化，轻柔吹打混匀后200目细胞筛过滤，滤液在1 500 r/min的离心机中离心5 min，去上清液，换DMEM/F12培养基混悬细胞并接种于培养皿中，置体积分数为5%的CO2、37 ℃培养箱中培养。

即0.05 g/L的胰酶连续2次消化30 min后，再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。

人羊膜间充质干细胞的鉴定：参考文献[27]的方法采用采用免疫细胞化学和流式细胞分析人羊膜间充质干细胞的表型特征。人羊膜间充质干细胞明显表达间充质细胞标志物波形蛋白，不表达上皮细胞标志物角蛋白CK19，高表达CD29和CD44，具有骨髓间充质干细胞的表型特征。

人羊膜间充质干细胞形态观察：分别于培养后24 h，3 d，5 d，7 d，8 d采用倒置相差显微镜观察人羊膜间充质干细胞形态。

主要观察指标：分别观察采用不同方法体外培养的人羊膜间充质干细胞形态。2

结果 Results

经Ⅰ型胶原酶消化收集的细胞24 h后少部分细胞贴壁生长，刚贴壁的细胞呈圆形，折光性比较强，随后细胞逐渐展开，折光性减弱，经1周后形成扁平单层细胞，

随着细胞密度的增加，胞体变细长，形态类似成纤维细胞。

2.1 实验一结果方法一中培养的细胞呈圆形，折光性比较弱，细胞数量较少(图

1A1)；方法二中培养的细胞虽然数量较多，但细胞形态不好，混有其他种类细胞(图1A2)；方法三中培养的细胞数量较多，但细胞形态不好，混有其他种类细胞(图1A3)。

2.2 实验二结果培养的细胞形态较好，呈圆形，折光性较好，但细胞数量较少(图1B)。

2.3 实验三结果方法一中培养的细胞形态较好，呈圆形，折光性较好，细胞数量较多(图1C1)；方法二中培养的细胞形态较好，呈圆形，折光性好，细胞数量多(图1C2)。

2.4 实验四结果培养的细胞形态较好，呈圆形，折光性好，细胞数量最多，多次换液后折光性减弱，经1周后形成扁平单层细胞，随着细胞密度的增加，胞体变细长，形态类似成纤维细胞(图2)。

图2 实验四方法培养结果(×10)Figure 2 Isolation and culture of human amniotic mesenchymal stem cells by digestion with 0.05 g/L trypsin for 30 minutes twice followed by 1 g/L of collagenase digestion of 60 minutes in experiment 4 (×10)图注：采用0.05 g/L的胰酶连续2次消化30 min后，再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min人羊膜间充质干细胞接种3，5，7，8 d后培养的细胞形态较好，呈圆形，折光性好，细胞数量最多，多次换液后折光性减弱，经1周后形成扁平单层细胞，随着细胞密度的增加，胞体变细长，形态类似成纤维细胞。

3 讨论 Discussion

国内外文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致，但可以归纳为以下步骤，先将羊膜剪碎，再用胰蛋白酶消化，放入到37 ℃恒温箱中振荡孵育后取出离心，重复几次，以便更好地去除碎细胞和杂质。最后再用胶原酶消化后离心获取目的细胞[28-29]。作者认为这样提取人羊膜间充质干细胞必然会残留较多人羊膜上皮细

胞，给人羊膜间充质干细胞的获取和纯化都带来一定的不便。

本实验将传统方法进行改进，先用胰蛋白酶重复消化30 min后，再加入Ⅰ型胶原酶消化1 h，这样能更好更纯地把人羊膜间充质干细胞提取出来。国内外文献报道消化羊膜的胶原酶主要有胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ[28-29]，而胶原酶Ⅰ是基质金属蛋白酶亚类胶原酶中的 1 个亚型即胶原酶Ⅳ，它不但可以降解细胞间基质成分还可以降解基膜的主要成分－Ⅳ型胶原[30]。胶原酶Ⅱ主要用于肝、骨、甲状腺、心脏等组织消化，胶原酶Ⅳ主要消化胰腺组织。

实验还对这几种方法提取人羊膜间充质干细胞的效果进行比较。从实验结果中可见先胰酶消化后胶原酶Ⅰ消化的方法对人羊膜间充质干细胞保护较好，存活数较多，生长周期更快，获取细胞也更纯。

目前分离培养人羊膜间充质干细胞的主要方法是酶消化法，但尚无标准的分离流程和最适宜的条件。实验着重探究最适合消化时间及浓度。根据文献报道，作者先选择了2个文献中提到的分离条件，即实验一的方法一和实验二，然后在实验一方法一的基础上改变了消化的条件，即使用酶的方式，因为胶原酶是消化间充质细胞的，所以在方法二中单独使用了胶原酶而且延长了消化的时间，在方法三中用了两种酶混合的消化。

在第1次换液时对比了培养的结果，结果实验二的结果很好，作者者由此猜想可能先把上皮细胞用胰蛋白酶消化下来，那么胶原酶消化间充质细胞的效果会更好，而且相关英语文献中提到一般用胰蛋白酶消化2次的方法，所以设计了实验三的方法二，比方法一胰蛋白酶消化的时间长，但是换液时观察细胞形态数量，发现两种方法消化的细胞数量和形态差不多，可以推测用胰蛋白酶连续2次消化已经把上皮细胞完全消化下来，所以作者设计了实验四及加大了胶原酶的浓度，根据培养的形态确定了实验四是最适合的培养条件。

综合上述，通过先将剪碎的人羊膜用胰蛋白酶消化液消化后，再用胶原酶消化的改

进方法，对人羊膜间充质干细胞保护较好，较易提取，并且获取细胞量和纯度比前几种实验方法要好很多。

结论：①实验一中的几种方法都是没有完全将上皮细胞消化下来，从而间接导致间充质细胞没有消化下来，所以培养结果不理想。②实验二中胰酶和胶原酶的消化时间不够长，所以得到的间充质细胞不多。③实验三胰酶和胶原酶消化的时间合适，得到的细胞很多。④实验四胰酶和胶原酶消化的时间合适，而且胶原酶的浓度合适，得到的细胞数量最多。适合进一步的实验研究。

致谢：文章是在导师曹贵芳教授刘俊平副教授和丛姗师姐的悉心指导，以及师妹宋瑾和师弟黄利刚的帮助下完成的。导师渊博的专业知识，严谨的治学态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，平易近人的人格魅力对我影响深远。在此，谨向导师和师姐等表示崇高的敬意和衷心的感谢。

作者贡献：设计、实施、评估为本文作者，均受过专业培训。

利益冲突：文章及内容不涉及相关利益冲突。

伦理要求：实验过程中对动物处置符合 2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》标准。

学术术语：人羊膜上皮细胞-具有表达多种胚胎干细胞标记物的特点和较全面的多

向分化潜能，研究证实了人羊膜上皮细胞向三胚层分化的潜能。除表达胚胎干细胞表面抗原：SSSEA-3和SSSEA-4，肿瘤抗性基因TRA 1-60和TRA 1-81之外，

近来发现人羊膜上皮细胞还表达多潜能干细胞的转录因子。不表达CD34(造血干

细胞及内表干细胞表面标记)、SSSEA-1、CD133(造血干细胞、内皮细胞及恶性胶质瘤细胞表面标记)，弱表达c-kit(CD117)和CC趋化因子受体(CRR4)。

作者声明：文章为原创作品，无抄袭剽窃，无泄密及署名和专利争议，内容及数据真实，文责自负。

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