17 生物化学实验--葡萄糖氧化酶法测定血糖含量
葡萄糖氧化酶法测定血糖含量
【目的】
1 ．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验方法。
2 ．熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验原理。
【原理】
葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。溶液中的葡萄糖有α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。
GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。
【器材】
1 ．分光光度计
2 ．恒温水浴
3 ．微量加样器
4 ．刻度吸量管
5 ．中号试管
【试剂】
1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液
无水 Na 2 HPO 4 18.5g 和 KH 2 PO 4 5.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。
2 ．酶试剂
取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。冰箱内保存可稳定 3 个月。
3 ．酚试剂
酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。
4 ．酶 - 酚混合试剂
将试剂 2 、 3 等量混合。冰箱内保存可稳定 1 个月。
5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ）
无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。
6 ．葡萄糖应用标准液（ 100mg/dl ）
取葡萄糖标准液 5ml ，加 0.25% 苯甲酸溶液稀释定容至 100ml 。
7 ．蛋白沉淀剂
溶解 Na 2 HPO 4 10g 、 Na 2 WO 4 10g 、 NaCl 19g 于 800ml 蒸馏水中，加入 1mol/LHCl 125ml ，加蒸馏水至 1 000ml 混匀。
【操作】
1 ．血浆直接测定
取试管 3 只，标明测定、标准、空白，分别加入血清 20μl ，磷酸盐缓冲液20μl ，然后各管均加酶 - 酚混合剂各 3ml ，混匀后将 3 管同时置37 ℃ 水浴保温 15 min ，到时取出冷却。用 505nm 波长，以空白管调整零，读取各管吸光度值。
2 ．全血去蛋白血滤液测定
取蛋白沉淀剂 1ml 加全血 50μl 混匀，放置 7 分钟后，离心取上清 0.5ml 于测定管内；取蛋白沉淀剂 1ml 加葡萄糖应用标准液 50μl ，混匀后从中取
0.5ml 于标准管内；另取蛋白沉淀剂 0.5ml 于空白管内。以上三管各加酶 - 酚混合试剂 3ml ，各管分别混匀同时放入37 ℃ 水恒温箱浴保温 15 min 后，取出如前比色测定。
【计算】
血糖浓度（ mg/dl ）＝
血糖浓度 ( mmol/L) ＝
【注意事项】
1 ．葡萄糖氧化酶法测糖，色原性氧受体种类较多，以往曾多用邻联茴香胺等，因其有轻微致癌作用，现已很少应用。本实验介绍的方法为卫生部临床检验中心所推荐，该法测糖显色灵敏且稳定。
2 ．无水葡萄糖结晶属于α-D 型，溶于水中，部分葡萄糖发生变旋光作用，形成β型， 2 小时后α与β比例达成平衡，α型占 36% ，β型占 64% 。因此葡萄糖标准液需在葡萄糖溶解 2 小时后才能应用。
3 ．该酶法测糖特异性高，且干扰测定结果的特质较少。当溶血标本 Hb 达到 1g /dl ，黄疸标本胆红素浓度达到 20mgr/dl 时，都不大影响测定结果。样品中加入抗凝剂或糖分解抑制剂如草酸钾浓度达到 20mg/dl 、脚素达 60mg/dl 、 NaF 达 200mg/dl 时，均不干扰测定结果。标本中尿素达 280mg/dl 、甘油三酯达500mg/dl 时对测定结果无影响。而维生素 C 及谷胱甘肽等还原性物质可引起结果的负误差。
4 ．本法测糖的线性范围宽，至少可达 20mmol/L （ 360mg/dl ）。
5 ．本法测定血糖正常值为 70 ～ 110 mg/dl 或 3.9 ～ 6.1mmol/L 。
【思考题】
1 ．酶试剂为什么要用磷酸盐缓冲液配制，而不用蒸馏水配制？
2 ．试分析影响本实验的因素有哪些，为什么？
葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法是一种检测血糖的重要方法，被广泛用于从心血管疾病到糖尿病检测等多种临床诊断和研究领域。它可以帮助医生们诊断病人的血糖水平，以便确定合适的治疗方案，或者针对糖尿病患者的进一步管理。在过去的十年里，葡萄糖氧化酶法不断改进，以提高检测灵敏度和准确度，提供更加可靠的诊断结果。 葡萄糖氧化酶法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖发生反应的原理，葡萄糖氧化酶是一种酶，具有将不可溶性的葡萄糖氧化到果糖的能力，葡萄糖含量越高，葡萄糖被氧化的速度就越快，反应的活性也就越强。葡萄糖氧化酶法是利用这种反应特性，将样本中的葡萄糖氧化到果糖，并采用光学测定的方法检测果糖的浓度，从而实现血糖检测。 葡萄糖氧化酶法的检测过程通常包括样品前处理，反应检测和数据分析三个步骤。样品前处理主要是用来处理样品，去除干扰物质，使其在实验室中稳定存放，以便进一步测定。反应检测需要将样品、葡萄糖氧化酶溶液和可变因子（温度、pH值等）混合在一起，在一 定条件下，葡萄糖会被氧化到果糖，而检测其反应活性，即可获得血糖浓度值。最后，通过数据分析把检测结果转换成血糖浓度值，完成整个检测过程。 葡萄糖氧化酶法有着众多优点，其中最主要的一点是准确率高。因葡萄糖氧化酶具有较强的反应活性，而且反应过程也是快速的，所以其准确率较高，可以更准确的测定血糖的含量。此外，葡萄糖氧化酶法的另一个优点是样本量少，它可以用非常少的血液样本来测定血
糖的含量，相比于其他检测方法，它可以减少患者的抽血量，减轻患者的负担。 虽然葡萄糖氧化酶法有着许多优点，但也存在一定的缺点。首先，葡萄糖氧化酶法必须在一定温度和PH值范围内才能得到准确的结果，所以检测过程受异物的干扰较大，特别是有较多异物存在的样品，检测准确性会受到一定影响。另外，它需要借助复杂的仪器设备和先进的技术，只有在实验室条件下才能进行测定，不利于家庭自测。 总的来说，葡萄糖氧化酶法是一种重要的血糖检测方法，它具有准确性高，样本量少，但由于它受到温度和异物的影响较大，以及测定需要专业仪器设备，因此也不利于家庭自测。目前，国内外科研机构正不断努力改进这项技术，以满足各类临床和研究应用的需求。
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖(标准管法)
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖（标准管法） 实验目的： 1.了解自动生化分析仪的工作原理 2.熟悉糖尿病相关生化的检测项目及检测方法 3.掌握糖尿病相关生化检测项目的临床意义。 实验原理： 葡萄糖氧化酶法测空腹血糖:葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。在505nm波长测定该红色化合物的吸光度，能计算出葡萄糖含量。 实验操作： 1.将准备好的酶工作液（葡萄糖氧化酶和过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替 比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各3ml，再向标准管加20μl 葡萄糖标准液（5.55mmol/L），再向测定管加入20μl血清。 2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟 3.调节分光光度计波长505nm,透光度T至100%，将空白管酶工作液对光的 吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。 实验结果： 分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品血糖值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.55 分析讨论： 酶酚混合液变成了红色是否还可以继续使用？ 不可以。酶酚混合液应为无色，如酶酚混合液已经变为红色，说明试剂污染，不可使用。 思考题： 1.高血糖对机体的影响有哪些？ 1)引起血管、神经并发症。糖尿病患者长期高血糖会使血管、神 经并发症发生和发展使病 情加重。
2)β细胞功能衰竭。长期高血糖对胰岛β细胞不断刺激，使其功 能衰竭，胰岛素分泌更 少。 3)电解质紊乱。高血糖时大量排尿，从尿带走电解质，使电解质 紊乱。 4)严重失水。高血糖引起渗透性利尿，尿量增加，机体失水。 5)渗透压增高。高血糖时，细胞外液渗透压增高,细胞内液向细胞 外流动，导致细胞内失 水。当脑细胞失水时，可引起脑功能紊乱，临床上称高渗性昏迷。 6)全身乏力。血糖过高，葡萄糖不能很好地被机体吸收利用而从尿中排出。 7)视力减退。血糖升高时，眼睛视力往往减退。 2.糖尿病患者为何会出现尿糖阳性？ 糖尿病患者的血糖超过肾糖阈（8.96～10.08mmol/L）时，近端小管对葡萄糖的重吸收达到极限，尿中开始出现葡萄糖。 3.胰岛素对人体有哪些生理作用？ 1）对血糖代谢的调节：促进细胞摄取葡萄糖。血糖浓度升高时,迅速引起胰岛素的分泌,使全身各组织加速摄取和储存葡萄糖,尤 其能加速肝细胞和肌细胞摄取葡萄糖,并且促进它们对葡萄糖的 贮存和利用。肌肉组织在无胰岛素作用时，几乎不能摄取葡萄糖。 肝细胞和肌细胞大量吸收葡萄糖后, -方面将其转化为糖原贮存 起来，或在肝细胞内将葡萄糖转变成脂肪酸，转运到脂肪组织贮 存;在肝脏,胰岛素使进食后吸收的葡萄糖大量转化成糖原,并促 进葡萄糖转变成脂肪酸,转运到脂肪组织贮存.此外胰岛素还抑 制糖原异生。胰岛素不但可使葡萄糖迅速转运入肌细胞,而且可 加速葡萄糖的利用和肌糖原的合成,从而使血糖浓度降低。胰岛 素缺乏时糖不能被贮存利用。另一方面促进葡萄糖氧化生成高能 磷酸化合物作为能量来源,结果使血糖水平下降。 2）对脂肪代谢的调节：胰岛素对脂肪合成和贮存起着非常重要的作
17 生物化学实验--葡萄糖氧化酶法测定血糖含量
葡萄糖氧化酶法测定血糖含量 【目的】 1 ．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验方法。 2 ．熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验原理。 【原理】 葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。溶液中的葡萄糖有α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。 GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。 【器材】 1 ．分光光度计 2 ．恒温水浴
3 ．微量加样器 4 ．刻度吸量管 5 ．中号试管 【试剂】 1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液 无水 Na 2 HPO 4 18.5g 和 KH 2 PO 4 5.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。 2 ．酶试剂 取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。冰箱内保存可稳定 3 个月。 3 ．酚试剂 酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。 4 ．酶 - 酚混合试剂 将试剂 2 、 3 等量混合。冰箱内保存可稳定 1 个月。 5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ） 无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。 6 ．葡萄糖应用标准液（ 100mg/dl ） 取葡萄糖标准液 5ml ，加 0.25% 苯甲酸溶液稀释定容至 100ml 。 7 ．蛋白沉淀剂 溶解 Na 2 HPO 4 10g 、 Na 2 WO 4 10g 、 NaCl 19g 于 800ml 蒸馏水中，加入 1mol/LHCl 125ml ，加蒸馏水至 1 000ml 混匀。 【操作】 1 ．血浆直接测定
葡萄糖测定葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
试验八血糖的测定葡萄糖氧化酶法
实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 POD 2H 2O 2H 2O 2 O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。GOD 葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2 POD H2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g，加
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 引言： 血糖是人体内能量的重要来源之一，它对人体的正常运作至关重要。因此，准 确测量血糖水平对于疾病的诊断、治疗以及健康管理具有重要意义。本实验旨 在通过葡萄糖氧化酶法测量血液中的葡萄糖含量，以了解该方法的原理和应用。实验步骤： 1. 实验前准备：准备好实验所需的血糖试纸、葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶 试剂等。 2. 取一滴指尖血：使用消毒棉球清洁手指，用无菌针刺破手指的一侧，轻轻挤 压手指，使血液形成一滴。 3. 涂抹血液：将取得的血液滴在血糖试纸上，确保试纸完全吸收血液。 4. 加入试剂：将葡萄糖氧化酶试剂滴在试纸上，与血液充分混合。 5. 反应时间：根据试纸说明书上的时间要求，等待一定时间，让试剂与血液中 的葡萄糖发生氧化反应。 6. 读取结果：将试纸放入专用的血糖仪中，等待仪器显示血糖浓度。 实验结果： 通过实验测量，我们得到了不同血液样本的血糖浓度。根据实验数据，我们可 以得出以下结论： 1. 血糖水平与时间的关系：我们发现血糖水平在不同时间段内有所变化。通常 情况下，饭后血糖浓度会升高，而空腹时血糖浓度较低。这与人体对葡萄糖的 代谢过程有关。
2. 血糖水平与饮食的关系：我们还观察到不同饮食对血糖水平的影响。高糖饮食会导致血糖浓度升高，而低糖饮食则相对较低。这提示我们在日常生活中要注意饮食结构的合理安排。 3. 血糖水平与运动的关系：运动对血糖水平也有一定影响。剧烈运动会使血糖浓度下降，而适量运动则有助于维持血糖水平的稳定。这表明运动对于血糖控制的重要性。 实验原理： 葡萄糖氧化酶法是一种常用的测量血糖浓度的方法。其原理是葡萄糖氧化酶能将葡萄糖催化氧化为葡萄糖酸，并伴随着还原型辅酶NAD+的还原为NADH。通过测量NADH的光学密度变化，可以间接地测量血液中的葡萄糖浓度。 该方法的优点是操作简单、结果准确可靠。然而，也存在一些局限性，如对于血液中其他物质的干扰较为敏感，需要进行进一步的校正和排除。 实验应用： 葡萄糖氧化酶法广泛应用于临床医学中，用于测量血液中的葡萄糖浓度。通过血糖监测，可以及时了解患者的血糖水平，辅助诊断和治疗糖尿病等疾病。此外，血糖监测还可以用于健康管理，帮助人们掌握自己的健康状况，及时调整饮食和生活方式。 结论： 通过本实验，我们深入了解了葡萄糖氧化酶法测血糖的原理和应用。血糖浓度的测量对于疾病的诊断、治疗和健康管理具有重要意义。葡萄糖氧化酶法作为一种常用的测量方法，具有操作简单、结果准确可靠等优点，但也需要注意其局限性和干扰因素的排除。通过实验，我们对血糖测量有了更深入的了解，为
葡萄糖氧化酶法的实验报告
葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 ．/L 磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml 中，用1mol/L 氢氧化钠调pH 至，用蒸馏水定容至1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1
200U ，葡萄糖氧化酶1 200U ，4- 氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。3 ．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1 个月。 5 ．12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L 。 6 ．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。2h 以后方可使用。 7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 操作步骤
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围空腹血清葡萄糖为～/L 。 临床意义 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用 1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。
2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u， 4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶 试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。 6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以 12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾
实验 血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度： 【样本】 新鲜无溶血血清。
【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。 空白管校准管样品管工作液 1.50 ml 1.50 ml 1.50 ml 蒸馏水0.01 ml ———— 校准液——0.01 ml —— 样品————0.01 ml 分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616. 2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）， 2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃）， 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20µl 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个 6.记号笔6支 7.蒸馏水1瓶
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 血糖是指血液中葡萄糖的含量。葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。 一、实验原理 血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。具体反应式为： (1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2 (2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2 (3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物） 其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。 二、实验材料 1.血糖标准品：10mmol/L 2.葡萄糖氧化酶 3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH） 4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5） 5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管 三、实验步骤 1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、 15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。 2.实验组织：3个组别，每组3个试管。A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。注意，每组要做三个平行实验。 3.反应体系准备：
①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。 ②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。 ③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。 ⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。 ⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。 4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。 四、实验注意事项 1.所有试剂瓶和仪器须充分清洗和消毒。 2.离心管和移液管须标志清楚，避免误用。 3.实验过程中，要控制温度、时间、试剂用量等的准确性。 4.检测样品所用的选择性比色法适用于酸性条件，需加入碱液以改变溶液PH值。 5.实验结果的准确性与精密度与试剂的质量、设备的精度等因素有关，需实验者严格操作。
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 实验目的，通过葡萄糖氧化酶法测定不同浓度的葡萄糖溶液，并利用标准曲线测定未知血糖浓度。 实验原理，葡萄糖氧化酶是一种特异性酶，只能催化葡萄糖的氧化反应。在此反应中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时还伴随着NAD+被还原成NADH+H+。而NADH+H+在紫外光下有较强的吸收，其吸收峰位于340nm处。因此，可以通过测定NADH+H+的吸光度来间接测定葡萄糖的浓度。 实验步骤： 1. 预先配制不同浓度的葡萄糖溶液，分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、 0.3mmol/L、0.4mmol/L和0.5mmol/L。 2. 取5个比色管，分别加入0.5ml不同浓度的葡萄糖溶液。 3. 加入0.5ml葡萄糖氧化酶溶液，混匀后放置在37℃恒温槽中反应10分钟。 4. 分别加入0.5mlNADH+H+溶液，混匀后立即测定吸光度A1。 5. 将比色管放入37℃恒温槽中反应5分钟后，再次测定吸光度A2。 实验数据处理： 1. 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度差ΔA（ΔA=A2-A1）为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 用标准曲线测定未知血糖浓度。 实验结果，标准曲线方程为ΔA=0.05C+0.01，R²=0.998，未知血糖浓度为 0.35mmol/L。
实验结论，通过葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，可以得到准确的结果。标准曲线的斜率与浓度呈线性关系，R²接近1，说明实验结果可靠。未知血糖浓度为 0.35mmol/L，与实际值接近，证明该方法准确可靠。 实验注意事项： 1. 实验中要注意葡萄糖溶液和酶溶液的配制浓度，避免误差。 2. 在测定吸光度时，要确保比色管内溶液充分混匀，避免测定误差。 实验改进： 1. 可以尝试使用其他方法验证实验结果，提高实验的可靠性。 2. 可以尝试改变反应条件，如温度、反应时间等，观察对实验结果的影响。 总结，葡萄糖氧化酶法是一种常用的测定血糖浓度的方法，通过本次实验验证了其准确性和可靠性。在实际应用中，可以根据标准曲线测定未知血糖浓度，为临床诊断和治疗提供重要参考依据。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化的法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量0 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧 化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的酶类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 【样本】 新鲜无溶血血清。 【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液
分别混合均匀，37c水浴10〜15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm 比色杯光径1.0cm,用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 寝-- x校准液浓度简旬糖（mmol/L）=“强器 简萄褚（n】g/dl）二mmol/LX 18 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L （70 —110 mg/dl）。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1.全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997, P616. 2. Trinder P. Ann Clin Biochem, 1969, 6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）, 2.恒温水浴箱（能调温度的，37C）, 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20 M 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5. 烧杯100ml一个，50ml （或25ml） 6个 6.记号笔6支 7.蒸储水1瓶
生物化学实验八 血糖的定量测定—葡萄糖氧化酶-氨基安
实验八血糖的定量测定—葡萄糖氧化酶-氨基安 替比林(GOD-PAP)法 一、目的要求 学习和掌握用葡萄糖氧化酶-氨基安替比林(GOD-PAP)法测定血糖含量的原理和方法。 二、实验原理 动物血液中的糖主要是葡萄糖。正常情况下，其含量处于动力学稳态。健康家兔的血糖水平为80~120mg/dL(dL代表100ml)。GOD-PAP法是以葡萄糖氧化酶和过氧化物酶相连接的测定方法，可用于测定血糖样品中的葡萄糖含量。在生物体系中，许多酶促反应的底物和产物都不能吸收光。因此，在测定催化该反应的酶时，常常将其与另一个涉及底物或产物有特征性光吸收变化的酶反应相偶联。例如，在葡萄糖氧化酶作用下，底物葡萄糖特异转化为产物葡萄糖酸和过氧化氢，底物和产物都并无可见光吸收。但是，在有过氧化物酶的存在下，过氧化氢能与4-氨基安替比林(色素原)反应产生红色化合物，其最大光吸收在480~550nm，能很容易地进行测定。 GOD-PAP法测定血糖的酶反应为： 葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖氧化酶(GOD) →葡萄糖酸+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶(POD) →醌亚胺+4H2O 醌亚胺在480~550nm波长有最大吸收，所产生颜色的深浅与血清中葡萄糖的量成正比。通过比色测定和计算即可求出样品中葡萄糖的含量。 三、材料、器材与试剂 1〉材料 兔血清。 2〉器材 试管、试管架、吸管、洗耳球、微量移液管、恒温水浴、分光光度计。 3〉试剂 (1)血糖试剂盒。 其中有酶试剂：葡萄糖氧化酶(GOD) ﹥13U/mL 过氧化物酶(POD) ﹥0.9U/mL 磷酸缓冲液：磷酸盐11mmol/L 酚100mmol/L pH 7.0 4-氨基安替比林0.77mmol/L 葡萄糖标准液100mg/dL (2)工作液的配制。使用时，将90ml磷酸缓冲液与10ml酶制剂混匀即可。称此混匀的溶液为工作液。每一试剂盒装有2瓶磷酸缓冲液和2瓶酶制剂。 四、实验步骤 (1)取3支试管，按表加入试剂。