葡萄糖氧化酶法的实验报告
葡萄糖氧化酶法的实验报告
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篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖
【原理】
葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用
1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。
2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶
试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。
5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。
6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以
12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。
7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】
1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2．手工操作法取试管3支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】
【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。
【临床意义】
1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾
上腺分泌增加时。2．病理性高血糖
(1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不
足的糖尿病患者。
(2)内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质
功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
(3)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4)脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使
血糖轻度增高。3．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4．病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等)
(1)胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌
过多。
(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3)严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能
低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【注意事项】
1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡
萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧(:葡萄糖氧化酶
法的实验报告)化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一
反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。
2．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但
不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
取草酸钾6g，氟化钠4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到试管内，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天内不凝固并抑制糖分解。
4．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，
再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。
5．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
【评价】线性范围至少可达22.24mmol/L，回收率94%～105%，批内cV为0.7%～2.0%。批间cV为2%左右，日间cV
为2%～3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，73份标本
葡萄糖氧化酶法均值为8.31mmol/L，已糖激酶法均值
8.21mmol/L，相关系数为0.9986，回归方程y=1.0026x－2.29。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。
食物中葡萄糖的测定
食物中葡萄糖的测定 葡萄糖氧化酶法 1.原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，此有色物质在625nm 波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。 2.适用范围 适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食物样品和血液样品。检出量为0.02 mg。 3.仪器 722分光光度计。 4.试剂： 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）乙醇。 （2） 40% 三氯乙酸：称取40g 三氯乙酸，用水溶解并稀释至100ml。 （3） 2 mol/L NaOH 溶液：称取8g NaOH，用水溶解并稀释至100ml。 （4） 1 % 邻联甲苯胺溶液：称取0.1 g 邻联甲苯胺溶解于10 ml无水乙醇中，倒入棕色瓶中，4 ℃冰箱保存。 （5）乙酸缓冲液（pH 5.0）：称取14.28 g 乙酸钠（CH3COONa?3H2O）溶于水中，加入2.7 ml 冰乙酸，并调节pH 5.0，用水定容至1 L。 （6）葡萄糖氧化酶溶液：称取一定量的葡萄糖氧化酶（Sigma 公司）用水溶解，使酶含量为100 U/ml。4 ℃冰箱保存一周。 （7）过氧化物酶溶液： 0.010 g 辣根过氧化物酶溶于10 ml 水中，4 ℃冰箱保存一周。（8）酶溶液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱可保存七周。 （9）酶空白液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱保存一周。（注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶） （10）葡萄糖标准液：将葡萄糖标准品（纯度大于99%）于80 ℃干燥至恒量。精确称取0.050 g，用水移入100 ml 容量瓶中，定容至刻度线。相当于浓度为0.5 mg/ml。 5.操作步骤： 5.1样品处理： （1）固体样品：称取0.5～5g已粉碎的样品于锥形瓶中，加入50ml水后沸水浴15min。冷
实验八血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）
实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 POD 2H 2O 2H 2O 2 O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧 化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度: 新鲜无溶血血清。 【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液
分别混合均匀，37C水浴10?15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm 比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 葡萄糖（mmol/L） = ------------------ ^校准液浓度 葡萄桃（mg/dl）二mmol/L X18 【参考值】 血清/ 血浆：3.89 —6.11 mmol/L （70 —110 mg/dl）。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1. 全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997, P616. 2. Trinder P. Ann Clin Biochem，1969, 6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1. 紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）， 2. 恒温水浴箱（能调温度的，37C）, 3. 移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20山6个），枪头各100个 4. 试管50支，6个试管架 5. 烧杯100m一个，50ml （或25ml）6个 6. 记号笔6支 7. 蒸馏水1瓶
17 生物化学实验--葡萄糖氧化酶法测定血糖含量
葡萄糖氧化酶法测定血糖含量 【目的】 1 ．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验方法。 2 ．熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验原理。 【原理】 葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。溶液中的葡萄糖有α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。 GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。 【器材】 1 ．分光光度计 2 ．恒温水浴
3 ．微量加样器 4 ．刻度吸量管 5 ．中号试管 【试剂】 1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液 无水 Na 2 HPO 4 18.5g 和 KH 2 PO 4 5.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。 2 ．酶试剂 取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。冰箱内保存可稳定 3 个月。 3 ．酚试剂 酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。 4 ．酶 - 酚混合试剂 将试剂 2 、 3 等量混合。冰箱内保存可稳定 1 个月。 5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ） 无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。 6 ．葡萄糖应用标准液（ 100mg/dl ） 取葡萄糖标准液 5ml ，加 0.25% 苯甲酸溶液稀释定容至 100ml 。 7 ．蛋白沉淀剂 溶解 Na 2 HPO 4 10g 、 Na 2 WO 4 10g 、 NaCl 19g 于 800ml 蒸馏水中，加入 1mol/LHCl 125ml ，加蒸馏水至 1 000ml 混匀。 【操作】 1 ．血浆直接测定
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用 1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。 2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml
中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶 试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。 6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以 12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾 上腺分泌增加时。2．病理性高血糖 (1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 引言： 血糖是人体内能量的重要来源之一，它对人体的正常运作至关重要。因此，准 确测量血糖水平对于疾病的诊断、治疗以及健康管理具有重要意义。本实验旨 在通过葡萄糖氧化酶法测量血液中的葡萄糖含量，以了解该方法的原理和应用。实验步骤： 1. 实验前准备：准备好实验所需的血糖试纸、葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶 试剂等。 2. 取一滴指尖血：使用消毒棉球清洁手指，用无菌针刺破手指的一侧，轻轻挤 压手指，使血液形成一滴。 3. 涂抹血液：将取得的血液滴在血糖试纸上，确保试纸完全吸收血液。 4. 加入试剂：将葡萄糖氧化酶试剂滴在试纸上，与血液充分混合。 5. 反应时间：根据试纸说明书上的时间要求，等待一定时间，让试剂与血液中 的葡萄糖发生氧化反应。 6. 读取结果：将试纸放入专用的血糖仪中，等待仪器显示血糖浓度。 实验结果： 通过实验测量，我们得到了不同血液样本的血糖浓度。根据实验数据，我们可 以得出以下结论： 1. 血糖水平与时间的关系：我们发现血糖水平在不同时间段内有所变化。通常 情况下，饭后血糖浓度会升高，而空腹时血糖浓度较低。这与人体对葡萄糖的 代谢过程有关。
2. 血糖水平与饮食的关系：我们还观察到不同饮食对血糖水平的影响。高糖饮食会导致血糖浓度升高，而低糖饮食则相对较低。这提示我们在日常生活中要注意饮食结构的合理安排。 3. 血糖水平与运动的关系：运动对血糖水平也有一定影响。剧烈运动会使血糖浓度下降，而适量运动则有助于维持血糖水平的稳定。这表明运动对于血糖控制的重要性。 实验原理： 葡萄糖氧化酶法是一种常用的测量血糖浓度的方法。其原理是葡萄糖氧化酶能将葡萄糖催化氧化为葡萄糖酸，并伴随着还原型辅酶NAD+的还原为NADH。通过测量NADH的光学密度变化，可以间接地测量血液中的葡萄糖浓度。 该方法的优点是操作简单、结果准确可靠。然而，也存在一些局限性，如对于血液中其他物质的干扰较为敏感，需要进行进一步的校正和排除。 实验应用： 葡萄糖氧化酶法广泛应用于临床医学中，用于测量血液中的葡萄糖浓度。通过血糖监测，可以及时了解患者的血糖水平，辅助诊断和治疗糖尿病等疾病。此外，血糖监测还可以用于健康管理，帮助人们掌握自己的健康状况，及时调整饮食和生活方式。 结论： 通过本实验，我们深入了解了葡萄糖氧化酶法测血糖的原理和应用。血糖浓度的测量对于疾病的诊断、治疗和健康管理具有重要意义。葡萄糖氧化酶法作为一种常用的测量方法，具有操作简单、结果准确可靠等优点，但也需要注意其局限性和干扰因素的排除。通过实验，我们对血糖测量有了更深入的了解，为
葡萄糖氧化酶
葡萄糖氧化酶 一、酶的简介 葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase，简称GOD)能够在有氧气的条件下专一性催化β-D- 葡 萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢,高纯度GOD的制剂为淡黄色粉末、易溶于水，完全不溶于乙 醚、氯仿、甘油和乙二醇[1]。50%丙酮、66%甲醇能使其沉淀。它广泛地分布于动物、植物和 微生物体内，但由于微生物具有生长繁殖速度快，来源广等特点使之成为葡萄糖氧化酶的主 要来源，微生物中的主要生产菌株为黑曲霉和青霉。葡萄糖氧化酶是用黑曲霉等发酵制得的 一种需氧脱氢酶，对人体无毒、副作用，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等功能，它广泛应用 于食品、饲料、医药等行业中，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用。【2】 二、菌种及培养基 2.1 菌种：以黑曲霉H1-9b为菌种，在发酵罐中装入培养基 2.2 发酵培养基(g/L)：蔗糖80、蛋白胨3、KH2PO4 2、MgSO4·7H2O 0.7、KCl 0.5、 NaNO3 4，pH5.5； 斜面培养基(g/L)：蔗糖30、NaNO32、K2HPO41、KCl 0.5、MgSO4 0.5、FeSO40.01、 琼脂20，pH5.5【3】。 发酵条件为：26～29摄氏度，pH值自然，通风量0．3m3／(m3·min)，搅拌速度400r ／min。发酵液离心分离得菌丝体，经研磨(因葡萄糖氧化酶是一种胞内酶，提取时首先必须 先研磨破壁)后过滤，得到含葡萄糖氧化酶的滤液即酶液。[4] 三、工艺流程 葡萄糖氧化酶制备流程图 原料预处理培养基配制灭菌 无菌空气制备 发酵产品的分离纯化 菌种的制备和种子培养
葡萄糖氧化酶下游工艺流程图 3.1葡萄糖氧化酶的发酵 3.1.1种子液培养在斜面培养基上接种黑曲霉H1-9b 孢子，28℃培养4 ～5 d 。 3.1.2摇瓶发酵250mL 锥形瓶中分装50mL 发酵培养基，121℃灭菌20min，接种黑曲霉H1-9a 孢子浓度为104个/mL，28℃、200r/min 摇床培养80h 即达产酶高峰。 3.1.3菌丝体的制备摇瓶发酵培养完成后，用纱布过滤发酵液，收集球状菌丝体，用双蒸水将其反复冲洗，直至把发酵液冲干净；再用0.2mol/L pH5.7的磷酸缓冲液冲洗菌丝体，压干水分，称质量后收集备用[5]。 3.2 粗酶液的制备 本实验采用研磨法破碎菌丝体。将菌丝体置于研钵中，加入适量石英砂，对菌体进行研磨；充分研磨后按1:1(m/V)加入预冷的0.2mol/L pH5.7磷酸缓冲液浸提粗酶，4℃抽提2h。抽提完成后4℃、12000r/min 离心20min，取上清液，即为粗酶液，透析1d 后收集备用。 3.3 DEAE-Sepharose 离子交换层析 用300mL 0.05mol/L pH7.1的Tris-HCl缓冲溶液平衡DEAE-Sepharose 离子交换层析柱，取5mL 粗酶液上样，用0～1mol/L NaCl(用0.05mol/L，pH7.1 的Tris-HCl缓冲溶液配制)进行梯度洗脱，流速0.5mL/min，每管收集5mL，层析完成后收集GOD 活性管，透析脱
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖 【实验原理】 葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。 【实验准备】 一、材料 （1）血清 （2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆 二、试剂 （1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。 （2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。 （3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml） （4）生理盐水。 （5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。三、器材 （1）试管和试管架 （2）移液枪 （3）722型分光光度计 （4）酶标仪 （5）恒温水浴箱 （6）酶标板 （7）板条 （8）生化培养箱 【实验步骤】 （1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按 【实验结果】 葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55 参考值：3.89~6.11mmol/L 测得数据为 A2 A3 A4 A5 0.085 0.05 0.03 0.037
(0.037+0.030)/2 ——×5.55 ﹦2.75mmol/L （0.085+0.050/2 【实验讨论】 ①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习 ②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。 ③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因 此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。 ④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引 起误差。 ⑤葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖的反应15min达不到反应终点，应延长到25min【1】。 ⑥新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确 测定血糖【2】。 【参考文献】 1.王彦明，实用医技杂志，2008（05） 2.邹焕荣；何国坚；叶有玩，江西医学检验，2004（03）
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 实验目的，通过葡萄糖氧化酶法测定不同浓度的葡萄糖溶液，并利用标准曲线测定未知血糖浓度。 实验原理，葡萄糖氧化酶是一种特异性酶，只能催化葡萄糖的氧化反应。在此反应中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时还伴随着NAD+被还原成NADH+H+。而NADH+H+在紫外光下有较强的吸收，其吸收峰位于340nm处。因此，可以通过测定NADH+H+的吸光度来间接测定葡萄糖的浓度。 实验步骤： 1. 预先配制不同浓度的葡萄糖溶液，分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、 0.3mmol/L、0.4mmol/L和0.5mmol/L。 2. 取5个比色管，分别加入0.5ml不同浓度的葡萄糖溶液。 3. 加入0.5ml葡萄糖氧化酶溶液，混匀后放置在37℃恒温槽中反应10分钟。 4. 分别加入0.5mlNADH+H+溶液，混匀后立即测定吸光度A1。 5. 将比色管放入37℃恒温槽中反应5分钟后，再次测定吸光度A2。 实验数据处理： 1. 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度差ΔA（ΔA=A2-A1）为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 用标准曲线测定未知血糖浓度。 实验结果，标准曲线方程为ΔA=0.05C+0.01，R²=0.998，未知血糖浓度为 0.35mmol/L。
实验结论，通过葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，可以得到准确的结果。标准曲线的斜率与浓度呈线性关系，R²接近1，说明实验结果可靠。未知血糖浓度为 0.35mmol/L，与实际值接近，证明该方法准确可靠。 实验注意事项： 1. 实验中要注意葡萄糖溶液和酶溶液的配制浓度，避免误差。 2. 在测定吸光度时，要确保比色管内溶液充分混匀，避免测定误差。 实验改进： 1. 可以尝试使用其他方法验证实验结果，提高实验的可靠性。 2. 可以尝试改变反应条件，如温度、反应时间等，观察对实验结果的影响。 总结，葡萄糖氧化酶法是一种常用的测定血糖浓度的方法，通过本次实验验证了其准确性和可靠性。在实际应用中，可以根据标准曲线测定未知血糖浓度，为临床诊断和治疗提供重要参考依据。
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 血糖是指血液中葡萄糖的含量。葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。 一、实验原理 血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。具体反应式为： (1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2 (2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2 (3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物） 其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。 二、实验材料 1.血糖标准品：10mmol/L 2.葡萄糖氧化酶 3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH） 4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5） 5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管 三、实验步骤 1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、 15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。 2.实验组织：3个组别，每组3个试管。A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。注意，每组要做三个平行实验。 3.反应体系准备：
①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。 ②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。 ③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。 ⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。 ⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。 4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。 四、实验注意事项 1.所有试剂瓶和仪器须充分清洗和消毒。 2.离心管和移液管须标志清楚，避免误用。 3.实验过程中，要控制温度、时间、试剂用量等的准确性。 4.检测样品所用的选择性比色法适用于酸性条件，需加入碱液以改变溶液PH值。 5.实验结果的准确性与精密度与试剂的质量、设备的精度等因素有关，需实验者严格操作。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 ．/L 磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml 中，用1mol/L 氢氧化钠调pH 至，用蒸馏水定容至1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1
200U ，葡萄糖氧化酶1 200U ，4- 氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。3 ．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1 个月。 5 ．12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L 。 6 ．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。2h 以后方可使用。 7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 操作步骤
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围空腹血清葡萄糖为～/L 。 临床意义 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化的法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量0 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧 化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的酶类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 【样本】 新鲜无溶血血清。 【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液
分别混合均匀，37c水浴10〜15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm 比色杯光径1.0cm,用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 寝-- x校准液浓度简旬糖（mmol/L）=“强器 简萄褚（n】g/dl）二mmol/LX 18 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L （70 —110 mg/dl）。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1.全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997, P616. 2. Trinder P. Ann Clin Biochem, 1969, 6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）, 2.恒温水浴箱（能调温度的，37C）, 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20 M 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5. 烧杯100ml一个，50ml （或25ml） 6个 6.记号笔6支 7.蒸储水1瓶
血糖的测定实验报告
血糖的测定实验报告 本实验旨在通过化学方法测定人体血糖的含量，了解血糖测定对于糖尿病等疾病的诊断和治疗的重要性。 血糖是指血液中葡萄糖的含量。血糖测定是临床医学中非常重要的检查项目，对于糖尿病、低血糖等疾病具有诊断和监控作用。本实验采用氧化酶法进行血糖测定。 准备试剂和器材：血糖试纸、采血针、微量采血管、计时器。 采集样本：采集手指末梢血，用采血针刺破手指，将血液滴到血糖试纸的测试区域。 计时：从血液滴到试纸开始计时，等待5秒钟后读取血糖数值。 记录数据：将测得的血糖数值记录在实验报告中。 正常范围：空腹全血血糖为9-9mmol/L（70-110mg/dL），血浆血糖为9-9mmol/L（70-125mg/dL）。餐后一小时血糖正常值不超过1mmol/L （200mg/dL），餐后两小时血糖正常值不超过8mmol/L（140mg/dL）。异常范围：空腹全血血糖≥7mmol/L（120mg/dL）及血浆血糖≥8mmol/L （140mg/dL），应重复一次，仍达以上值者，可以确诊为糖尿病。当
空腹全血血糖超过6mmol/L（100mg/dL），血浆血糖超过4mmol/L （115mg/dL）时，应对糖耐量减低者的餐后血糖进行测定，以便确诊有无糖尿病。空腹全血血糖低于是8mmol/L（50mg/dL），血浆血糖低于9mmol/L（70mg/dL）时，且可同时伴有神经精神症状，称为低糖血症。需要注意的是，糖尿病的诊断通常需要两次以上的检测结果才能确诊。 通过本次实验，我们了解了血糖测定的基本方法和正常范围。血糖测定对于糖尿病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。在日常生活中，我们需要注意饮食和运动，保持身体健康。如果发现血糖异常，应及时就医并进行相关检查和治疗。 根系是植物生长和发育的重要部分，其活力直接影响到植物的整体生长状态和产量。因此，准确测定根系活力对于理解和改善植物生长具有重要意义。本文将综述根系活力测定的常用方法，实验步骤以及应用领域，以期为相关领域的研究者提供有用的参考。 根系活力是指根系进行正常生命活动的能力，包括根系的生长、吸收、合成和分解等生理过程。这些过程都受到根系内部生物化学反应的影响，因此通过测定根系活力，可以了解植物的生长状况和胁迫响应。TTC法（氯化三苯基四氮唑法）：此方法基于TTC（氯化三苯基四氮
氧化酶的实验报告
氧化酶的实验报告 氧化酶的实验报告 引言： 氧化酶是一类催化氧化反应的酶，它在生物体内起着至关重要的作用。本实验旨在探究氧化酶的催化机制和其在生物体内的功能。 实验材料与方法： 1. 实验材料： - 氧化酶溶液 - 底物溶液（如葡萄糖溶液） - 反应物质（如过氧化氢溶液） - 实验仪器（如比色皿、试管、移液管等） 2. 实验方法： a. 准备工作： - 将比色皿清洗干净并晾干。 - 准备所需的实验材料。 b. 实验步骤： 1) 在比色皿中加入一定量的底物溶液。 2) 向底物溶液中滴加适量的氧化酶溶液。 3) 等待一定时间，观察反应是否发生。 4) 如果反应发生，加入适量的反应物质（如过氧化氢溶液）停止反应。 5) 使用比色皿上的色谱仪或光度计测量反应液的吸光度。 6) 根据吸光度值，计算出反应的速率或浓度。
实验结果与讨论： 在本实验中，我们选取了葡萄糖作为底物，并探究了氧化酶对葡萄糖的催化作用。实验结果显示，加入氧化酶溶液后，葡萄糖发生了氧化反应，产生了一种可见的颜色变化。这表明氧化酶催化了葡萄糖的氧化反应。 进一步的实验表明，当我们加入过氧化氢溶液停止反应时，颜色变化停止，说明过氧化氢作为反应物质被氧化酶催化分解了。这进一步证实了氧化酶对底物的催化作用。 通过测量反应液的吸光度，我们可以得到关于反应速率或浓度的定量数据。这些数据对于研究氧化酶的催化机制以及在生物体内的功能至关重要。 氧化酶在生物体内起着重要的作用。以葡萄糖氧化酶为例，它在生物体内催化葡萄糖的氧化反应，产生能量和二氧化碳。这个过程是细胞呼吸的重要组成部分，为细胞提供能量。 此外，氧化酶还参与许多其他生物化学反应。例如，乳酸氧化酶参与乳酸的氧化反应，将其转化为丙酮酸。这个过程在肌肉运动时起到重要作用，帮助身体恢复正常状态。 结论： 通过本实验，我们探究了氧化酶的催化机制和其在生物体内的功能。实验结果表明，氧化酶能够催化底物的氧化反应，并且通过测量吸光度可以定量分析反应速率或浓度。氧化酶在生物体内起着重要的作用，参与细胞呼吸等生物化学反应。这些研究对于深入理解氧化酶的功能和应用具有重要意义。 附录： 实验中使用的氧化酶溶液和底物溶液的制备方法可以参考相关实验手册或咨询
血糖的测定实验报告
血糖的测定实验报告 引言： 血糖是指血液中糖类代谢产物的浓度，对人体的健康十分重要。人体通过食物摄入的碳水化合物会在代谢过程中产生葡萄糖，而 葡萄糖则进入血液中供给身体各组织细胞所需。然而，过高或过 低的血糖水平都会对人体带来不利影响，因此准确测定血糖水平 显得十分重要。本实验旨在探讨血糖的测定方法以及不同因素对 结果的影响。 实验方法： 实验分为两个部分：试纸法和酶法。在试纸法中，我们使用了 一种常用的血糖试纸，通过对试纸上荧光荧光强度的测量，来确 定血糖的含量。而在酶法中，我们则使用了葡萄糖氧化酶来催化 葡萄糖的氧化反应并测量产生的化学反应物的光吸收强度。 实验结果：
在试纸法中，我们将一定浓度的葡萄糖溶液依次滴入试纸，观 察试纸上产生的荧光强度变化，并进行测量。实验结果显示，随 着葡萄糖溶液浓度的增加，试纸上的荧光强度逐渐提高，与浓度 呈正相关。这说明试纸法是一种有效且可靠的血糖测定方法。 在酶法中，我们制备了一系列葡萄糖溶液，分别加入适量的葡 萄糖氧化酶和试剂，然后测量其光吸收强度。实验结果显示，随 着葡萄糖溶液浓度的增加，光吸收强度也逐渐增加。与试纸法相似，酶法也能够准确测定血糖水平，但其对试剂的选择和操作相 对复杂一些。 讨论与分析： 本实验结果表明，无论是试纸法还是酶法，都可以有效测定血 糖水平。两种方法的原理基本相同，即通过测量产物的荧光强度 或光吸收强度来反映血糖的浓度。但酶法需要辅助试剂的加入， 相对来说操作较为繁琐。 此外，本实验还发现，除了血糖浓度的变化外，其他因素也可 能对测定结果产生影响。例如，温度和pH值的变化都可能导致酶的活性受到影响，从而影响测定结果。因此，在进行血糖测定时，