葡萄糖(Glu)测定氧化酶法标准操作程序SOP文件
实验八血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）
实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 POD 2H 2O 2H 2O 2 O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
GLU文档,糖化血红蛋白(HbA1c)检测标准操作规程
1、方法依据： 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司葡萄糖（GLU）测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）测定方法 2、适用范围： 适用于人血清、血浆葡萄糖的测定。 3、试剂仪器： 3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。 3.2未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气体和通风良好的室内，在2℃～8℃有效期为一年。试剂开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定1个月。试剂不可冰冻。 3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪. 4、操作程序 4.1方法原理 葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得葡萄糖的含量。 4.2样本要求 空腹血清或血浆。如血浆在采集30分钟内分离，保存在2℃～8℃可稳定24小时。 4.3上机操作 4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。 4.3.2 校准： 4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。 4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。当有以下情况时需重新校准：
1）换试剂批号或出现质控漂移时； 2）当仪器做完保养后； 3）仪器进行零件更换时。 每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。 4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。 4.3.3 测试基本参数 4.4参考范围 3.33～6.11 mmol/L（60～110 mg/dL） （注：各实验室应有自己的参考范围。） 4.5 方法评价 线性范围：0.3～28 mmol/L。样本中含量超出可报告范围，请用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。反应曲线异常时应进行重复测定确认。 精密度：批内CV ≤ 3.0% 批间CV ≤ 5.0% 分析灵敏度：本试剂盒的检测低限不高于0.3 mmol/L。 5、临床意义 糖是人体的主要供能物质，也是组织细胞的主要成分。血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖症状。 1 、病理性高血糖：（ 1 ）原发性糖尿病； （ 2）内分泌疾病：嗜铬细胞瘤、甲状腺毒瘤、肢端肥大症、巨人症、 Cushing 综合症、高血糖素细胞瘤；
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖(标准管法)
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖（标准管法） 实验目的： 1.了解自动生化分析仪的工作原理 2.熟悉糖尿病相关生化的检测项目及检测方法 3.掌握糖尿病相关生化检测项目的临床意义。 实验原理： 葡萄糖氧化酶法测空腹血糖:葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。在505nm波长测定该红色化合物的吸光度，能计算出葡萄糖含量。 实验操作： 1.将准备好的酶工作液（葡萄糖氧化酶和过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替 比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各3ml，再向标准管加20μl 葡萄糖标准液（5.55mmol/L），再向测定管加入20μl血清。 2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟 3.调节分光光度计波长505nm,透光度T至100%，将空白管酶工作液对光的 吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。 实验结果： 分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品血糖值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.55 分析讨论： 酶酚混合液变成了红色是否还可以继续使用？ 不可以。酶酚混合液应为无色，如酶酚混合液已经变为红色，说明试剂污染，不可使用。 思考题： 1.高血糖对机体的影响有哪些？ 1)引起血管、神经并发症。糖尿病患者长期高血糖会使血管、神 经并发症发生和发展使病 情加重。
2)β细胞功能衰竭。长期高血糖对胰岛β细胞不断刺激，使其功 能衰竭，胰岛素分泌更 少。 3)电解质紊乱。高血糖时大量排尿，从尿带走电解质，使电解质 紊乱。 4)严重失水。高血糖引起渗透性利尿，尿量增加，机体失水。 5)渗透压增高。高血糖时，细胞外液渗透压增高,细胞内液向细胞 外流动，导致细胞内失 水。当脑细胞失水时，可引起脑功能紊乱，临床上称高渗性昏迷。 6)全身乏力。血糖过高，葡萄糖不能很好地被机体吸收利用而从尿中排出。 7)视力减退。血糖升高时，眼睛视力往往减退。 2.糖尿病患者为何会出现尿糖阳性？ 糖尿病患者的血糖超过肾糖阈（8.96～10.08mmol/L）时，近端小管对葡萄糖的重吸收达到极限，尿中开始出现葡萄糖。 3.胰岛素对人体有哪些生理作用？ 1）对血糖代谢的调节：促进细胞摄取葡萄糖。血糖浓度升高时,迅速引起胰岛素的分泌,使全身各组织加速摄取和储存葡萄糖,尤 其能加速肝细胞和肌细胞摄取葡萄糖,并且促进它们对葡萄糖的 贮存和利用。肌肉组织在无胰岛素作用时，几乎不能摄取葡萄糖。 肝细胞和肌细胞大量吸收葡萄糖后, -方面将其转化为糖原贮存 起来，或在肝细胞内将葡萄糖转变成脂肪酸，转运到脂肪组织贮 存;在肝脏,胰岛素使进食后吸收的葡萄糖大量转化成糖原,并促 进葡萄糖转变成脂肪酸,转运到脂肪组织贮存.此外胰岛素还抑 制糖原异生。胰岛素不但可使葡萄糖迅速转运入肌细胞,而且可 加速葡萄糖的利用和肌糖原的合成,从而使血糖浓度降低。胰岛 素缺乏时糖不能被贮存利用。另一方面促进葡萄糖氧化生成高能 磷酸化合物作为能量来源,结果使血糖水平下降。 2）对脂肪代谢的调节：胰岛素对脂肪合成和贮存起着非常重要的作
葡萄糖测定葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
葡萄糖测定试剂盒-氧化酶法(精)
葡萄糖测定试剂盒-氧化酶法 Glucose使用说明书（液体双试剂） 【用途】： 用于自动生化分析仪体外测定血清葡萄糖含量。 血糖增高：糖尿病、垂体前叶功能亢进、肾上腺皮质功能亢进、脑膜炎、胰癌等。 血糖降低：饥饿、胰岛素分泌过多、甲减、急性肝损害、原发性肝癌等。 【方法学原理】： 葡萄糖＋O2＋H2O 葡萄糖氧化酶 −→ −−−−葡萄糖酸＋H2O2 H2O2＋4-氨基安替比林＋苯酚 过氧化物酶 −→ −−−−醌亚胺染料＋H2O 【使用方法】： [仪器要求]：适用于各类全自动生化分析仪或半自动生化分析仪。 [标本要求]：标本在30分钟内分离血清，否则由于糖酵解使结果降低；用草酸钾—氟化钠为抗凝剂可抑制糖分解，分离血清(浆)标本在2-8℃可稳定24小时，-20℃冷冻可稳定30天。 [稳定性与保存]：试剂2～8℃贮存可稳定一年；单试剂工作液在2～8℃贮存可稳定一个月。 【结果计算】： GLU含量(mmol/L)=标准 C A A S T⨯ 【正常参考值】： 3.89-6.11mmol/L (70-110mg/dl) 低血糖症临界水平2.7-3.89mmol/L 高血糖症临界水平6.11-7.22mmol/L 建议各实验室建立自己的正常参考值范围 【注意事项】： 1、试剂与样品的用量可按其比例放大缩小，计算公式不变。 2、谷胱甘肽，10mg/dl左旋多巴可能引起负偏差。 3、双试剂法可有效消除维生素C、胆红素等的干扰。 【性能特征】： 1、试剂空白：<0.300 2、线性范围：0-23mmol/L 3、准确度：与质控血清靶值相对偏差应≤10％ 4、精密度：n=20 批内CV≤5% 批间极差≤6% 【医疗器械生产企业许可证】：沪药管械生产许2004 【产品注册号】：沪食药监械（准）字号 【执行标准】：YZB/沪0840-40-2005 上海容铸诊断产品有限公司 上海浦东电话：02190761
SOP-Glu(己糖激酶法)
目录 目录 (1) 第1章目的和范围 (2) 1.1 目的 (2) 1.2 适用范围 (2) 第2章操作规程 (2) 2.1 测定原理 (2) 2.2 试剂贮存与稳定性 (2) 2.3 试剂与样本准备 (2) 2.4 测定参数 (2) 2.5 操作步骤 (3) 2.6 校准和质控 (3) 第3章结果计算 (3) 3.1 吸光度变化的计算 (3) 3.2 浓度的计算 (3) 第4章方法学特性 (3) 4.1 正常参考范围 (3) 4.2 线性范围 (3) 第5章临床意义 (4) 第6章安全防护 (4)
第1章 目的和范围 1.1 目的 为用户使用迈瑞公司Glu （己糖激酶法）试剂时，提供正确的操作流程和操作规范。 1.2 适用范围 适用于各级医疗机构的用户。 第2章 操作规程 2.1 测定原理 葡萄糖＋ ATP 葡萄糖-6-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸 + NAD + 6-磷酸葡萄糖酸 + NADH + H + NADH 的生成，引起340nm 吸光度的增加，增加的幅度与样本中葡萄糖的浓度成正比。 2.2 试剂贮存与稳定性 试剂贮存在2～8℃环境时，在试剂盒上规定的有效期前可以保持稳定。 2.3 试剂与样本准备 本试剂为液体双试剂，取出后可以直接使用。 样本为血清或血浆，加入糖分解抑制剂（NaF ，KF ）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天、4～8℃保存可稳定7天。 2.4 测定参数 测定波长：340nm ； 分析类型：终点法，扣除试剂空白； 孵育时间：5分钟； 反应时间：5分钟； G6P-DH HK
第一试剂/样本/第二试剂比例：250/3/125。 记录吸光度A2 ，然后加R2： 125 μl R1： 250 μl 2.6 校准和质控 请使用迈瑞公司推荐的校准品和质控品。 第3章 结果计算 3.1 吸光度变化的计算 ΔA=[(A2－A1) 校准品管或样品管]–[(A2－A1)空白管] 3.2 浓度的计算 C 样本=（ΔA 样本／ΔA 校准）×C 校准 C 样本：为测定的样本浓度 C 标准：为校准品的浓度 第4章 方法学特性 4.1 正常参考范围 本法正常参考范围：3.6 mmol/l ~ 6.1 mmol/l （65～110mg/dl ） 4.2 线性范围 本法线性范围上限为25mmol/L ，当样品测定值超过上限时，应将样品用生理盐水作1+ 5稀释后重测，结果乘以6。
SOP标准操作程序-Glu
SOP标准操作程序 葡萄糖（货号：OSR6121，OSR6221） 实验原理： 血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）1。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发的，低血糖，郎格罕氏岛细胞癌科。 葡糖尿（存在含尿的葡萄糖）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中一个显著的变化10。 脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎中的细菌；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（同时分析，平衡血清葡萄糖不到40%到50%），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。 方法 Stein首先介绍已糖激酶G-6-PDH方法测定血清或血浆中的葡萄糖。一些研究2，3，4，5已经证明该方法的准确性和有效性。 在奥林巴斯AU640程序中，葡萄糖在三磷酸腺苷（A TP）和镁离子存在的情况下被已糖激酶（HK）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP）。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）使G-6-P氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原（NADH）。在340/380nm的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。 HK 葡萄糖+ ATP -------------﹥G-6-P+ ADP Mg2+ G6PDH G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+ 标本： 病人准备：优先选用12小时禁食的病人。 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离红血球，减少糖解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。 标本稳定性：血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时6。氟化物保护的血浆在25℃下可稳定24个小时，尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。 脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。 仪器与材料: 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪 材料：奥林巴斯AU640 葡萄糖
血清葡萄糖测定标准操作规程
葡萄糖测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：空腹血清葡萄糖测定(缩写GLU)，餐后2h葡萄糖测定，各种体液葡萄糖测定；组合项目申请：葡萄糖耐量试验(缩写OGTT)。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本 2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4抽血后室温放置超过4h以上的标本。 2.1.5.5静脉滴注大剂量维生素C后立即抽血的标本。 2.1.5.6其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清，并及时将血清与血球分离。 2.2.2标本保存时间：不抗凝血标本如血清未与血块分开，共存同一试管中，室温（15～25℃）下血清葡萄糖很不稳定，普通冰箱中（2～8℃）稳定1天。加氟化钠的血液标本室温（15～25℃）下稳定4h。 2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，单独分离出血清后，密闭置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项 2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。检查空腹血清葡萄糖的须在禁食12h以上早晨抽血。 2.3.2餐后2h葡萄糖检查，受检者于餐后2h准时抽血。 2.3.3葡萄糖耐量试验检查的血液标本，在服用75克葡萄糖后，分别于0.5h、1h、2h及3h准时抽血。 2.3.4为了避免葡萄糖被酵解，单独测定葡萄糖时，血标本可氟化钠-草酸钾抗凝，氟化钠用量为1.5mg/ml血。 3 方法原理 在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和三磷酸腺苷（ATP）发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖 【实验原理】 葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。 【实验准备】 一、材料 （1）血清 （2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆 二、试剂 （1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。 （2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。 （3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml） （4）生理盐水。 （5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。三、器材 （1）试管和试管架 （2）移液枪 （3）722型分光光度计 （4）酶标仪 （5）恒温水浴箱 （6）酶标板 （7）板条 （8）生化培养箱 【实验步骤】 （1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按 【实验结果】 葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55 参考值：3.89~6.11mmol/L 测得数据为 A2 A3 A4 A5 0.085 0.05 0.03 0.037
(0.037+0.030)/2 ——×5.55 ﹦2.75mmol/L （0.085+0.050/2 【实验讨论】 ①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习 ②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。 ③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因 此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。 ④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引 起误差。 ⑤葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖的反应15min达不到反应终点，应延长到25min【1】。 ⑥新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确 测定血糖【2】。 【参考文献】 1.王彦明，实用医技杂志，2008（05） 2.邹焕荣；何国坚；叶有玩，江西医学检验，2004（03）
葡萄糖检验标准操作规程
范围：葡萄糖 职责：检验室对本规程的实施负责 正文： 1.性状 ——本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末，无臭，味甜。本品在水中易溶，在乙醇中微溶。 1.1比旋度 ——取本品约10g，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量与氨试液0.2ml,溶解,用水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在25℃时依法测定并计算，比旋度为 +52.5°至+53.0°。 1.1.1执行SOP-QM-419《旋光度测定标准操作规程》。 1.1.2执行SOP-EM-302《WZZ-2B型自动指示旋光仪标准操作规程》。 1.1.3计算公式 旋光度×100 比旋度= 称样量×（1-水份） 2.鉴别 2.1取本品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。 2.2本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集464图）一致。 2.2.1执行SOP-QM-421《红外分光光度法标准操作规程》。 2.2.2执行SOP-EM-309《TJ270-30A型红外分光光度计标准操作规程》。 3.检查 3.1酸度 ——取本品 2.0g,加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.20ml，应显粉红色。 3.2溶液的澄清度与颜色 ——取本品5g，加热水溶解后,，放冷 , 用水稀释至10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液(取比色用氯化钴液 3ml，比色用重铬酸钾液3ml与比色用硫酸铜液6ml，加水稀释成50ml)1.0ml 加水稀释至10ml比较，不得更深。 3.2.1执行SOP-QM-413《澄清度检查标准操作规程》。 3.2.2执行SOP-QM-410《溶液颜色检查标准操作规程》。 3.3乙醇溶液的澄清度 ——取本品1.0g，加90%乙醇 30ml，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。 第1页共2页
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 血糖是指血液中葡萄糖的含量。葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。 一、实验原理 血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。具体反应式为： (1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2 (2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2 (3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物） 其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。 二、实验材料 1.血糖标准品：10mmol/L 2.葡萄糖氧化酶 3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH） 4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5） 5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管 三、实验步骤 1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、 15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。 2.实验组织：3个组别，每组3个试管。A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。注意，每组要做三个平行实验。 3.反应体系准备：
①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。 ②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。 ③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。 ⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。 ⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。 4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。 四、实验注意事项 1.所有试剂瓶和仪器须充分清洗和消毒。 2.离心管和移液管须标志清楚，避免误用。 3.实验过程中，要控制温度、时间、试剂用量等的准确性。 4.检测样品所用的选择性比色法适用于酸性条件，需加入碱液以改变溶液PH值。 5.实验结果的准确性与精密度与试剂的质量、设备的精度等因素有关，需实验者严格操作。
葡萄糖(GLU) 葡萄糖氧化酶终点法
项目方法葡萄糖（GLU） 葡萄糖氧化酶终点法 目录 1.检测原理 2.标本采集与处理 2.1受检者的准备 2.2静脉采血 2.3抗凝剂 2.4标本处理 3.试剂 3.1试剂 3.2校准血清 3.3试剂与校准血清的稳定性 4.仪器 5.操作 6.计算 7.操作性能 7.1精密度 7.2准确度 7.3灵敏度
7.4可报告范围 7.5特异性 7.6干扰 8.参考值 9.临床意义 附录A:参数 1.检测原理 在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。 GOD β-D-葡萄糖+H 2O+O 2-----------H 2O 2+D-葡萄糖酸 POD H 2O 2+4-氨基安替比林+苯酚----------醌亚胺（红色）+H 2O 2．标本采集与处理
2.1受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。 糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。 甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。 肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。 利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后，停药能自行恢复。 避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。 异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。当糖尿病合并肺结核时，异烟肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。其它：如烟酸及其衍生物、吩噻嗪类药物、
检验科生化葡萄糖测定的标准操作规程
葡萄糖测定的标准操作规程 【目的】 体外检测血清中葡萄糖（GLU ）的含量。 【职责】 1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。 2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。 【标本类型及实验前准备】 1.受检者的准备 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。 2.静脉采血 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 【仪器设备】 东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机 一、检测原理 本试剂所采用的反应式如下： 葡萄糖ATP HK葡糖糖6磷酸ADP 葡萄糖 6 磷酸 NAD G 6 PDH 6 PG NADH H 式中：ATP为三磷酸腺苷；ADP为二磷酸腺苷；HK为己糖激酶；G-6-PDH为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；6-PG为6-磷酸葡萄糖酸 上述反应中，NADH的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在340nm处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。
、试剂 1.试剂 本科使用上海复星长征医学科学有限公司HDL-C试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1） 三磷酸腺苷0.75mmol/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶375U/L NAD15mmol/L 哌嗪-N,N’ -双（2-乙磺酸）缓冲液 50 mmol/L 试剂2（R2） 己糖激酶60KU/L 哌嗪-N,N’ -双（2-乙磺酸）缓冲液 50 mmol/L 2.校准要求 2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号： 449 5 0/4 5 9 5 0对测定进行校准。 2. 2校准间隔 2. 2. 1试剂批号变更时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。 2. 2. 2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。 三、操作 按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、 样本测定的顺序进行常规测定。 四、计算 葡糖糖浓度（mmol/L）样本吸光度（A）校准液浓度（mmol/L） 校准品吸光度（A） 五、质控程序
生化实验室糖Glu葡萄糖氧化酶法作业指导书
生化实验室糖Glu葡萄糖氧化酶法作业指导书 1、前言 试验名称：葡萄糖测定，英文名称：Glu，方法：葡萄糖氧化酶法。 本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在OLYMPUS－AU400全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的葡萄糖浓度，以保证测定结果的准确可靠。 本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中葡萄糖的浓度。葡萄糖的准确测定对于诊断和治疗高血糖症和低血糖症是十分重要的，高血糖症可发生于糖尿病、静脉输入含葡萄糖液体、严重应激状态、脑血管意外，低血糖症可见于胰岛瘤、胰岛素用药，先天性碳水化合物代谢障碍和禁食。通常在研究这些病症时，还将葡萄糖测定与各种耐量试验和剌激试验一同进行。 2、测定原理 本试验采用改良的Trinder氏方法，其反应原理： 葡萄糖+O2+H2O GOD葡萄糖酸+H2O2 H2O2+AAP+HBA POD 醌亚胺色素+H2O 上式中AAP为4-氨基安替比林 HBA为4-羟基苯甲酸
GOD为葡萄糖氧化酶 POD为辣根过氧化物酶 在上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄的浓度成正比，通过在520nm波长处测定吸光度的变化值，从而计算出样本中葡萄糖的浓度。 3、试剂 试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。 剂型：液体双试剂。 包装量：R1：4*30ml R2：4*15ml 注册号：沪食药监械（准）字2010第2401171号。 生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。 基本成份： 试剂1： 过氧化物酶375u/l 4-羟基苯甲酸15mmol/l 4-氨基安替比林0.75mmol/l 磷酸盐缓冲液110mmol/l 试剂2： 磷酸盐缓冲液110mmol/l 葡萄糖氧化酶6000u/l 储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。启用后2―10℃可稳定30天，若试剂混浊，或空白在520nm
葡萄糖(GLU)-葡萄糖氧化酶终点法
目录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理
在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。 GOD β-D-葡萄糖 + H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸 POD H2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 ---------- 醌亚胺（红色）+ H2O 2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。 糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。 甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。 肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。 利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后，停药能自行恢复。 避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。 异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。当糖尿病合并肺结核时，异烟肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。
葡萄糖试剂盒(氧化酶法)标准操作程序
葡萄糖试剂盒（氧化酶法）标准操作程序 1. 摘要 本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中葡萄糖的含量。 2. 适用范围 程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清样本中葡萄糖的含量。 3. 职责 使用日立7600自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4. 检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是氧化酶法(GOD-POD)。 5. 原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下与水分子和氧分子反应生成葡萄糖酸和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物、4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色化合物醌亚胺。由于醌亚胺在波长500nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 500nm 处吸光度的变化值与样本中葡萄糖的含量成正比。 O H O H O H O O H 2222 2224+−−−→−+-++−−−−→−++醌亚胺苯酚氨基安替比林葡萄糖酸葡萄糖过氧化物酶葡萄糖氧化酶 6. 仪器 日立7600自动生化分析仪 7. 试剂 7.1 试剂来源： 上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分： R1：磷酸盐缓冲液、过氧化物酶、苯酚、防腐剂； R2：磷酸盐缓冲液、葡萄糖氧化酶、4-氨基安替比林、防腐剂； 校准品：葡萄糖、防腐剂 7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。开瓶后存放在生化分析仪 试剂仓中可稳定14天。
8.标准品和质量控制 8.1校准程序： 使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。 8.2质控品： 某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。每日在测定前做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。 8.3质控数据管理： 按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。 8.4质控判断规则： 按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》 8.5室间质评： 分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。 9.标本 9.1标本要求： 应取受检者空腹血，样本采样后应尽快分离血清，立即测定。 9.2标本拒收： 由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。 9.3标本处理： 收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。 10.测定程序： 10.1分析参数： 详见参数表。 10.2操作步骤： 签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。 10.3获取结果： 在日立7600仪器上或日立7600传送的中文系统电脑上查找相应结果。
葡萄糖检测标准操作规程SOP
葡萄糖 1.目的 规范葡萄糖测定的操作程序，确保葡萄糖测定结果准确。 2.检验方法 氧化酶法（两点终点法） 3.检验原理 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2 H 2O 2+4-AAP+苯酚 红色醌亚胺+4H 2O 在波长505nm 处比色，计算出GLU 浓度。 4.临床意义 临床检测GLU 浓度主要用于糖尿病诊断、昏迷鉴别诊断及糖代谢研究。 血糖增高主要见于：①生理性高血糖：可见于饭后1-2小时或情绪紧张肾上腺分泌增加时;②病理性高血糖：可见于内分泌功能障碍引起的糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎引起的颅内高压、脱水引起的高血糖、急慢性胰腺炎、肝功能障碍等。 血糖降低主要见于：①生理性低血糖：常见于饥饿和剧烈运动后。②病理性低血糖：可见于高胰岛素血症、非胰性肿瘤、糖原累积症、自身免疫性疾病、半乳糖血症和肾脏疾病等。 5.标本采集及干扰因素 5.1标本要求 空腹不抗凝静脉血2~3ml 。 5.2标本保存 室温保存，及时送检。血清ALT 在20-25℃可稳定24小时，在2-8℃储存可稳定7d ，-20℃冰冻保存可稳定30d 。 5.3注意事项 推荐选用血清，避免溶血，红细胞中ALT 比血浆高约7倍，溶血时红细胞内ALT 可进入血浆，导致测定结果偏高。标本应避免溶血、脂血、黄疸。 6.检测仪器 日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器 GO PO D
操作规程》。 7.试剂 7.1试剂品牌 美康生物 7.2包装规格 200mL （R1:2×65mL+R2:1×70mL ） 7.3主要组成成分 试剂 成分 含量（最终反应体系） 试剂1 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 苯酚 0.01×10-3mol/L 试剂2 葡萄糖氧化酶 16000u/L 过氧化物酶 1000u/L 4-氨基安替比林 0.02×10-3mol/L 不同批次的试剂不推荐混合使用 7.4储存条件有效期 试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。 7.5参数设置 全自动生化分析仪自带程序参数输入法，上述基本参数需结合该输入法，进行上机参数输入后试剂才能配套仪器自动测定。具体仪器的详细测定参数联系试剂公司。 8.校准程序 8.1校准品来源 主波长 505nm 辅助波长 600nm 反应方法 两点终点法 反应方向 向上 反应温度 37℃ 试剂1 180ul 样本 3ul 混匀，37℃孵育1-5min ，读取吸光度A 1 试剂2 90ul 混匀，37℃孵育8min ，读取吸光度A 2，计算ΔA=A 2-A 1