葡萄糖氧化酶或已糖激酶的定量测定法
葡萄糖氧化酶或已糖激酶的定量测定法
葡萄糖氧化酶或已糖激酶的定量测定法有多种。以下是其中常用的几种方法：
1. 葡萄糖测定盒法：根据葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢的特性，利用过氧化氢与酚类底物反应生成有色产物，通过测定产物的吸光度来确定葡萄糖浓度。
2. 葡萄糖氧化酶法：通过测定氧气消耗量或还原型葡萄糖氧化酶释放出的二氧化碳量来间接测定葡萄糖浓度。
3. 比色法：利用已糖激酶对已糖的催化反应，产生具有特定颜色的产物。通过测定产物的吸光度或荧光强度来确定已糖浓度。
4. 比重法：已糖在含有酸性溶剂的条件下形成有色化合物，通过测定溶液的比重来间接测定已糖浓度。
这些方法在实验室中经常用于定量测定葡萄糖氧化酶或已糖激酶的活性或浓度。选择适合的测定方法需要考虑具体的实验要求和条件。
葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法)
葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法) 简介： 葡萄糖(Glucose, Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布最广、最重要的一种单糖，属于多羟基醛。用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。 Leagene葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法)其检测原理是在己糖激酶的催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应生成葡萄糖-6-磷酸，后者与NAPD在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下发生氧化还原反应，生成6-磷酸葡萄糖酸和NAPDH，NADPD的生成量与葡萄糖浓度成正比，分光光度计进行比色测定。本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞、组织等样本中葡萄糖含量定量测定，特异性高，不受尿酸和抗坏血酸的干扰，故可以检测尿液中葡萄糖。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、生理盐水或PBS 2、离心管、小试管或96孔板 3、水浴锅或恒温箱 4、分光光度计或酶标仪编号 名称TC0703 20T TC0703 50T Storage 试剂(A): 显色试剂10ml2×12.5ml -20℃避光试剂(B): 酶试剂10ml 2×12.5ml -20℃避光临用前，按显色试剂：酶试剂混匀，即HK工作液，4℃保存。 试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml1ml -20℃使用说明书1份
5、全自动或半自动生化分析仪 操作步骤(仅供参考)： 1、样本处理： ①血清、血浆、脑脊液、尿液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗，离心，弃上清，留取沉淀。 c、加入的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min，制备好的裂解液不可离心，待用。 ③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。 2、分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪Glu测定操作: ①按下表依次加入试剂： 空白管(B)对照管(C)标准管(S)待测管(U)生理盐水(ml) 0.01 1.0 Glu标准(5mmol/L)(ml) 0.01 待测样本(ml) 0.01 0.01 HK工作液(ml) 1.0 1.0 1.0 ②充分混匀,水浴中孵育。 ③分光光度计测定340nm波长处吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 3、普通分光光度计(2ml比色杯)Glu测定操作: ①按下表依次加入试剂： 空白管(B)对照管(C)标准管(S)待测管(U)生理盐水(ml) 0.02 2.0 Glu标准(5mmol/L)(ml) 0.02 待测样本(ml) 0.02 0.02 HK工作液(ml) 2.0 2.0 2.0 ②充分混匀,水浴中孵育。 ③分光光度计测定波长处吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 4、酶标仪Glu测定操作: ①按下表依次加入试剂：
葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用 1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。 2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml
中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶 试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。 6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以 12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾 上腺分泌增加时。2．病理性高血糖 (1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不
葡萄糖氧化酶法的实验报告
葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 ．/L 磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml 中，用1mol/L 氢氧化钠调pH 至，用蒸馏水定容至1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1
200U ，葡萄糖氧化酶1 200U ，4- 氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。3 ．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1 个月。 5 ．12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L 。 6 ．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。2h 以后方可使用。 7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 操作步骤
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围空腹血清葡萄糖为～/L 。 临床意义 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
葡萄糖测试标准
葡萄糖测试标准 一、葡萄糖检测方法 葡萄糖的检测通常采用血液样本进行。常见的检测方法有以下几种： 1. 氧化酶法：通过葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应，产生过氧化氢，再经过氧化氢酶催化生成水和氧气，最后检测氧气或过氧化氢的量来计算葡萄糖浓度。 2. 己糖激酶法：利用己糖激酶催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸，再通过特异性化学反应检测葡萄糖浓度。 3. 葡萄糖脱氢酶法：利用葡萄糖脱氢酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸内酯，再检测还原型辅酶II的生成量来计算葡萄糖浓度。 二、葡萄糖正常值范围 葡萄糖的正常值范围根据不同年龄和性别略有差异，一般如下： 1. 空腹全血血糖：3.9-6.1mmol/L（70-110mg/dL）。 2. 空腹血清或血浆血糖： 3.9-6.9mmol/L（70-125mg/dL）。 3. 餐后2小时全血血糖：≤7.8mmol/L（≤140mg/dL）。 4. 餐后2小时血清或血浆血糖：≤8.9mmol/L（≤160mg/dL）。 三、葡萄糖异常值诊断 葡萄糖异常值的诊断主要依据血糖浓度的高低和持续时间的不同进行判断： 1. 空腹血糖≥7.0mmol/L（126mg/dL）或餐后2小时血糖≥11.1mmol/L （200mg/dL），可诊断为糖尿病。 2. 空腹血糖在6.1-7.0mmol/L（110-126mg/dL）之间为空腹血糖受损，餐后2小时血糖在7.8-11.1mmol/L（140-200mg/dL）之间为糖耐量异常。 3. 糖尿病患者经过治疗后，血糖控制达标，可视为正常；若血糖控制不达标或持续升高，可诊断为糖尿病。 4. 低血糖的诊断标准为血糖低于2.8mmol/L（50mg/dL），可导致头晕、心悸、出汗等症状。 四、葡萄糖检测准确性
八血糖的测定葡萄糖氧化酶法
实验十 血糖的测定 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一, 其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。 不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及 反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要 有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase , GOD ）能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后 者在过氧化物酶（Peroxidase , POD 作用下，分解为水和氧的同时将无色的 4-氨基安替比 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1.0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.0） 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至 2.酶试剂 称取过氧化物酶1200U ,葡萄糖氧化酶1200U, 4-氨基安替比林10mg 叠氮钠100mg 溶于上述磷酸盐缓冲液 80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至 100ml 。 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在 3. 9mmol / L 〜6. Immol / L 有着双重实际意义: 其二，保证机体 林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trin der 反应。其颜色的深浅在一定范围内 与葡萄糖浓度成正比，在 505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。 反应式如下: 葡萄糖 GOD + C 2 + 2H 2O ----------- ” 葡萄糖酸 + 2H 2O 2 2H 2O 2 + 4-氨基安替比林 +酚一PO a 红色醌类化合物 1L 。
血清葡萄糖己糖激酶测定法
血清葡萄糖（GLU）己糖激酶（HK法）测定 法 1.实验原理 己糖激酶紫外比色测定法。 HK 葡萄糖+ ATP -------------﹥G-6-P+ ADP Mg2+ G6PDH G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+ 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。 3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂申能血糖测定试剂盒（141 2517170 1 试剂1 6×64ml＋试剂2 6×16ml） 6.1.1 试剂组成 试剂1： Tris缓冲液pH7.8 80mmol/L Mg2+4mmol/L ATP 1.7mmol/L NAD 1.7mmol/L 试剂2：
Mg2+4mmol/L 己糖激酶>1500U/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶>1500U/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品血糖校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。手工测定计算方法为： Au 葡萄糖浓度（mmol/L）＝×校准液浓度 As 12. 参考值范围：（mmol/L） 新生儿 脐带血 3.5～8.8 1小时 2.0～5.5
葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)试剂盒与己糖激酶法(HK)试剂盒测定血糖比较
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）试剂盒与己糖激酶法（HK）试 剂盒测定血糖比较 摘要:通过对本实验室常规使用的己糖激酶法试剂盒的比较，分析葡萄糖氧化酶 法试剂盒检测血糖的可靠性和应用性。对本实验室使用的血糖测定参考方法HK 法试剂盒与GOD-POD法试剂盒从重复性、试剂稳定性、特异性等方面进行比较。结果显示GOD-POD法在重复性、试剂稳定性等方面均能满足一般实验室要求， 且与HK法相关性良好。 关键词：GOD-POD、HK、血糖测定、方法比较1 引言 。血糖测定是诊断糖尿病的重要依据，血糖的准确测定对诊断和处理高血糖 和低血糖症十分重要测定方法主要有化学法和酶法，而酶法有分为葡萄糖氧化酶 与过氧化物酶偶联的的GOD-POD法及己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联的HK 法。酶法中的GOD-POD法，因具有操作简单，无毒、无害，试剂已商品化、易 于质控、价格低等优点，现已广泛用于临床。为此，将GOD-POD法与血糖参考 方法HK法从重复性、试剂稳定性、特异性及两种方法的相关性方面作比较，现 报告如下： 2 材料与方法 2.1仪器与试剂 己糖激酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号：20110310 葡萄糖氧化酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号：20110310 胆红素校准品（430 umol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101120 血糖中值质控品（4.80 mmol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101008 血糖高值质控品（11.20mmol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101008 日立-7180全自动生化分析仪 2.2方法 按试剂盒使用说明设置参数和操作。 2.2.1重复性试验取两个血糖浓度的定值质控血清用两种方法分别平行测20次，计算批 内误差。另取两个血糖浓度同一批号定值质控血清用两种方法每天各做两次，累计20个结果，计算天间误差。 2.2.2回收试验取若干健康体检人群血清混合，分装，按9:1的比例分别加入浓度为4.80 mmol/L和11.20 mmol/l的糖标准溶液，用两种方法分别测定，每种方法的每一浓度平行测定 三次，分别计算回收率。 2.2.3 干扰试验取胆红素含量为4 3.00umol/L左右的血清用两种方法分别测定血糖浓度， 比较胆红素对两种方法的干扰。 2.2.4方法比较实验用两种方法分别测定100例体检人员血清中的血糖浓度（每天测20份，共做5天），进行相关和回归处理，观察两方法的相关性。 2.2.5 统计学方法 D检验、T检验、F检验 2.3 GOD-POD法、HK法检测依据：根据《全国临床操作规程》第三版中的糖类测定执行。 3 结果 3.1 重复性试验 结果见表1和表2。 在两试剂盒共同线性范围0.02-22.30mmol/L范围内，线性相关结果y=0.8668x+0.4842， 相关系数r=0.9038有一定相关性，作两样本均数t检验t值为2.16（查表P＜0.05），说明两