葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法是一种生物化学方法，其原理是通过酶来将葡萄糖从糖原分解
成乙酸和乳酸，并以测定所得乙酸和乳酸含量来测定葡萄糖的含量。本文将为您介绍葡萄糖氧化酶法的基本原理。
首先，用糖原水解酶破坏糖原的三聚糖键，使其分解为单糖分子。之后，糖原
水解酶将单糖生成木糖醇，并由木糖醇活化酶催化得到乙酸、乳酸和羟脲，如有必要，可以进一步分解为乳酸脱氢酶、乙酸脱氢酶和羟脲脱氢酶，从而生成若干类微量氨基酸。
最后，可以通过分光光度、色表法、紫外分析等方法来测定乙酸和乳酸的含量，并运用相应的公式计算出当量葡萄糖含量。
总之，葡萄糖氧化酶法是一种利用糖原水解酶催化的生物化学反应，在破坏糖
原的三聚糖键、生成乙酸和乳酸之后，再进行相应的实验检测来测定葡萄糖含量，可应用于食品行业以及营养研究。
葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法是一种检测血糖的重要方法，被广泛用于从心血管疾病到糖尿病检测等多种临床诊断和研究领域。它可以帮助医生们诊断病人的血糖水平，以便确定合适的治疗方案，或者针对糖尿病患者的进一步管理。在过去的十年里，葡萄糖氧化酶法不断改进，以提高检测灵敏度和准确度，提供更加可靠的诊断结果。 葡萄糖氧化酶法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖发生反应的原理，葡萄糖氧化酶是一种酶，具有将不可溶性的葡萄糖氧化到果糖的能力，葡萄糖含量越高，葡萄糖被氧化的速度就越快，反应的活性也就越强。葡萄糖氧化酶法是利用这种反应特性，将样本中的葡萄糖氧化到果糖，并采用光学测定的方法检测果糖的浓度，从而实现血糖检测。 葡萄糖氧化酶法的检测过程通常包括样品前处理，反应检测和数据分析三个步骤。样品前处理主要是用来处理样品，去除干扰物质，使其在实验室中稳定存放，以便进一步测定。反应检测需要将样品、葡萄糖氧化酶溶液和可变因子（温度、pH值等）混合在一起，在一 定条件下，葡萄糖会被氧化到果糖，而检测其反应活性，即可获得血糖浓度值。最后，通过数据分析把检测结果转换成血糖浓度值，完成整个检测过程。 葡萄糖氧化酶法有着众多优点，其中最主要的一点是准确率高。因葡萄糖氧化酶具有较强的反应活性，而且反应过程也是快速的，所以其准确率较高，可以更准确的测定血糖的含量。此外，葡萄糖氧化酶法的另一个优点是样本量少，它可以用非常少的血液样本来测定血
糖的含量，相比于其他检测方法，它可以减少患者的抽血量，减轻患者的负担。 虽然葡萄糖氧化酶法有着许多优点，但也存在一定的缺点。首先，葡萄糖氧化酶法必须在一定温度和PH值范围内才能得到准确的结果，所以检测过程受异物的干扰较大，特别是有较多异物存在的样品，检测准确性会受到一定影响。另外，它需要借助复杂的仪器设备和先进的技术，只有在实验室条件下才能进行测定，不利于家庭自测。 总的来说，葡萄糖氧化酶法是一种重要的血糖检测方法，它具有准确性高，样本量少，但由于它受到温度和异物的影响较大，以及测定需要专业仪器设备，因此也不利于家庭自测。目前，国内外科研机构正不断努力改进这项技术，以满足各类临床和研究应用的需求。
实验八血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）
实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 POD 2H 2O 2H 2O 2 O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
葡萄糖(GLU) 葡萄糖氧化酶终点法
目录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理
在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。 GOD β-D-葡萄糖+ H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸 POD H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚---------- 醌亚胺（红色）+ H2O 2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。 糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。 甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。 肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。 利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后，停药能自行恢复。 避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。 异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。当糖尿病合并肺结核时，异烟肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖(标准管法)
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖（标准管法） 实验目的： 1.了解自动生化分析仪的工作原理 2.熟悉糖尿病相关生化的检测项目及检测方法 3.掌握糖尿病相关生化检测项目的临床意义。 实验原理： 葡萄糖氧化酶法测空腹血糖:葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。在505nm波长测定该红色化合物的吸光度，能计算出葡萄糖含量。 实验操作： 1.将准备好的酶工作液（葡萄糖氧化酶和过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替 比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各3ml，再向标准管加20μl 葡萄糖标准液（5.55mmol/L），再向测定管加入20μl血清。 2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟 3.调节分光光度计波长505nm,透光度T至100%，将空白管酶工作液对光的 吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。 实验结果： 分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品血糖值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.55 分析讨论： 酶酚混合液变成了红色是否还可以继续使用？ 不可以。酶酚混合液应为无色，如酶酚混合液已经变为红色，说明试剂污染，不可使用。 思考题： 1.高血糖对机体的影响有哪些？ 1)引起血管、神经并发症。糖尿病患者长期高血糖会使血管、神 经并发症发生和发展使病 情加重。
2)β细胞功能衰竭。长期高血糖对胰岛β细胞不断刺激，使其功 能衰竭，胰岛素分泌更 少。 3)电解质紊乱。高血糖时大量排尿，从尿带走电解质，使电解质 紊乱。 4)严重失水。高血糖引起渗透性利尿，尿量增加，机体失水。 5)渗透压增高。高血糖时，细胞外液渗透压增高,细胞内液向细胞 外流动，导致细胞内失 水。当脑细胞失水时，可引起脑功能紊乱，临床上称高渗性昏迷。 6)全身乏力。血糖过高，葡萄糖不能很好地被机体吸收利用而从尿中排出。 7)视力减退。血糖升高时，眼睛视力往往减退。 2.糖尿病患者为何会出现尿糖阳性？ 糖尿病患者的血糖超过肾糖阈（8.96～10.08mmol/L）时，近端小管对葡萄糖的重吸收达到极限，尿中开始出现葡萄糖。 3.胰岛素对人体有哪些生理作用？ 1）对血糖代谢的调节：促进细胞摄取葡萄糖。血糖浓度升高时,迅速引起胰岛素的分泌,使全身各组织加速摄取和储存葡萄糖,尤 其能加速肝细胞和肌细胞摄取葡萄糖,并且促进它们对葡萄糖的 贮存和利用。肌肉组织在无胰岛素作用时，几乎不能摄取葡萄糖。 肝细胞和肌细胞大量吸收葡萄糖后, -方面将其转化为糖原贮存 起来，或在肝细胞内将葡萄糖转变成脂肪酸，转运到脂肪组织贮 存;在肝脏,胰岛素使进食后吸收的葡萄糖大量转化成糖原,并促 进葡萄糖转变成脂肪酸,转运到脂肪组织贮存.此外胰岛素还抑 制糖原异生。胰岛素不但可使葡萄糖迅速转运入肌细胞,而且可 加速葡萄糖的利用和肌糖原的合成,从而使血糖浓度降低。胰岛 素缺乏时糖不能被贮存利用。另一方面促进葡萄糖氧化生成高能 磷酸化合物作为能量来源,结果使血糖水平下降。 2）对脂肪代谢的调节：胰岛素对脂肪合成和贮存起着非常重要的作
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。GOD 葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2 POD H2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g，加
葡萄糖氧化酶
葡萄糖氧化酶 一、酶的简介 葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase，简称GOD)能够在有氧气的条件下专一性催化β-D- 葡 萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢,高纯度GOD的制剂为淡黄色粉末、易溶于水，完全不溶于乙 醚、氯仿、甘油和乙二醇[1]。50%丙酮、66%甲醇能使其沉淀。它广泛地分布于动物、植物和 微生物体内，但由于微生物具有生长繁殖速度快，来源广等特点使之成为葡萄糖氧化酶的主 要来源，微生物中的主要生产菌株为黑曲霉和青霉。葡萄糖氧化酶是用黑曲霉等发酵制得的 一种需氧脱氢酶，对人体无毒、副作用，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等功能，它广泛应用 于食品、饲料、医药等行业中，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用。【2】 二、菌种及培养基 2.1 菌种：以黑曲霉H1-9b为菌种，在发酵罐中装入培养基 2.2 发酵培养基(g/L)：蔗糖80、蛋白胨3、KH2PO4 2、MgSO4·7H2O 0.7、KCl 0.5、 NaNO3 4，pH5.5； 斜面培养基(g/L)：蔗糖30、NaNO32、K2HPO41、KCl 0.5、MgSO4 0.5、FeSO40.01、 琼脂20，pH5.5【3】。 发酵条件为：26～29摄氏度，pH值自然，通风量0．3m3／(m3·min)，搅拌速度400r ／min。发酵液离心分离得菌丝体，经研磨(因葡萄糖氧化酶是一种胞内酶，提取时首先必须 先研磨破壁)后过滤，得到含葡萄糖氧化酶的滤液即酶液。[4] 三、工艺流程 葡萄糖氧化酶制备流程图 原料预处理培养基配制灭菌 无菌空气制备 发酵产品的分离纯化 菌种的制备和种子培养
葡萄糖氧化酶下游工艺流程图 3.1葡萄糖氧化酶的发酵 3.1.1种子液培养在斜面培养基上接种黑曲霉H1-9b 孢子，28℃培养4 ～5 d 。 3.1.2摇瓶发酵250mL 锥形瓶中分装50mL 发酵培养基，121℃灭菌20min，接种黑曲霉H1-9a 孢子浓度为104个/mL，28℃、200r/min 摇床培养80h 即达产酶高峰。 3.1.3菌丝体的制备摇瓶发酵培养完成后，用纱布过滤发酵液，收集球状菌丝体，用双蒸水将其反复冲洗，直至把发酵液冲干净；再用0.2mol/L pH5.7的磷酸缓冲液冲洗菌丝体，压干水分，称质量后收集备用[5]。 3.2 粗酶液的制备 本实验采用研磨法破碎菌丝体。将菌丝体置于研钵中，加入适量石英砂，对菌体进行研磨；充分研磨后按1:1(m/V)加入预冷的0.2mol/L pH5.7磷酸缓冲液浸提粗酶，4℃抽提2h。抽提完成后4℃、12000r/min 离心20min，取上清液，即为粗酶液，透析1d 后收集备用。 3.3 DEAE-Sepharose 离子交换层析 用300mL 0.05mol/L pH7.1的Tris-HCl缓冲溶液平衡DEAE-Sepharose 离子交换层析柱，取5mL 粗酶液上样，用0～1mol/L NaCl(用0.05mol/L，pH7.1 的Tris-HCl缓冲溶液配制)进行梯度洗脱，流速0.5mL/min，每管收集5mL，层析完成后收集GOD 活性管，透析脱
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用 1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。
2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u， 4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶 试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。 6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以 12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾
葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法是指将葡萄糖（Glc）作为底物，由某种特殊酶（G6Pase）催化氧化而产生氢氧化物（H2O2），该反应又称为微量氢 氧化物（MDA）生成反应。由于葡萄糖氧化酶法具有灵敏度高、反应 时间短、反应简便、检测量程广等特点，近些年来在生物医药领域的研究应用越来越广泛，因此对于葡萄糖氧化酶法的介绍显得尤为重要。 一、葡萄糖氧化酶法的原理 葡萄糖氧化酶法是通过由某种特殊酶（G6Pase）催化葡萄糖氧化而产生氢氧化物（H2O2），再由过氧化氢酶（H2O2ase）催化H2O2反应，最后将H2O2转化为电荷被电极检测，测定其等效电导率，来判 断溶液中glc浓度。该过程简称为G6Pase-H2O2ase流程。 二、葡萄糖氧化酶法的性能特点 ①灵敏度高。以G6Pase酶为催化剂利用葡萄糖氧化酶法检测浓 度非常低的葡萄糖，其灵敏度可达1μM。 ②反应时间短。由于采用了G6Pase酶催化葡萄糖氧化，所以在 H2O2ase催化下，在室温下其反应时间仅为几分钟。 ③反应简便。葡萄糖氧化酶法的解决方案简单，只需要简单的试剂和仪器，实验过程也很简单，不用配制和稳定各种溶液，只需几步就可完成检测。 ④检测量程广。葡萄糖氧化酶法可从0.5μM到10.0mM范围内检测葡萄糖浓度。 三、葡萄糖氧化酶法的实际应用
葡萄糖氧化酶法广泛应用于药物研发、疾病检测以及抗病毒活性等领域，由于其具有灵敏度高、反应时间短、反应简便以及检测量程广等特点，受到了广大科研人员的关注。 （1）药物研发。葡萄糖氧化酶法可以方便快捷地检测药物活性，从而为药物研发提供重要依据。 （2）疾病检测。葡萄糖氧化酶法可用于检测血液中的葡萄糖浓度，可以快速有效地诊断糖尿病。 （3）抗病毒活性的检测。葡萄糖氧化酶法可用于检测抗病毒药物的活性，以便快速有效地诊断抗病毒药物的抗病毒活性。 综上所述，葡萄糖氧化酶法的发展为广大科研人员提供了一种新的检测技术，在药物研发、疾病检测以及抗病毒活性等领域均有着重要的应用价值。
葡萄糖氧化酶法测血糖
实验三葡萄糖氧化酶法测血糖 一、实验目的 1.掌握分光光度计使用方法 2.掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理 二、原理 葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。溶液中的葡萄糖有 α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。 GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。 3、器材 1.分光光度计 2.恒温水浴 3.微量加样器
4.刻度吸量管 5.中号试管 【试剂】 1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液 无水 Na 2HPO 4 18.5g 和 KH 2 PO 4 5.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。 2 ．酶试剂 取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。冰箱内保存可稳定 3 个月。 3 ．酚试剂 酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。 4 ．酶 - 酚混合试剂 将试剂 2 、 3 等量混合。冰箱内保存可稳定 1 个月。 5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ） 无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。 6 ．葡萄糖应用标准液（ 100mg/dl ） 取葡萄糖标准液 5ml ，加 0.25% 苯甲酸溶液稀释定容至 100ml 。 【操作】 1 ．血浆直接测定 取试管 3 只，标明测定、标准、空白，分别加入血清20μl ，葡萄糖应用标准液20μl ，苯甲酸溶液20μl；然后各管均加酶 - 酚混合剂各 3ml ，混匀后将3 管同时置37 ℃ 水浴保温 15 min ，到时取出冷却。用 505nm 波长，以空白管调整零，读取各管吸光度值。
氧化酶法测定葡萄糖的原理
氧化酶法测定葡萄糖的原理 一、引言 在生化分析中，准确测定物质的含量是非常重要的，而葡萄糖作为一种常见的单糖，其测定方法也备受关注。本文将介绍一种常用的方法——氧化酶法，该方法以氧化酶作为催化剂，将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并通过测定葡萄糖酸的含量来间接测定葡萄糖的浓度。 二、原理 1. 葡萄糖的氧化反应 氧化酶可以催化葡萄糖与待定电子受体（如辅酶NAD+）之间的氧化反应，生成相应的葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。该反应的化学方程式如下： 葡萄糖+ NAD+ + H2O → 葡萄糖酸 + NADH + H+ 这个氧化反应是一个底物与辅酶之间的双电子转移反应。 2. 氧化酶的作用 氧化酶作为催化剂可以显著加速上述葡萄糖的氧化反应，降低反应的活化能，提高反应速率。同时，氧化酶本身不参与反应，因此可以被反复使用。 3. 检测葡萄糖酸含量
利用化学分析方法，可以测定葡萄糖酸的含量，进而间接推算出葡萄糖的浓度。常用的方法包括光度法、电化学法等。 三、方法步骤 1. 准备样品 将待测样品中的葡萄糖转化为葡萄糖酸，通常需要进行酸水解、酶水解等预处理步骤，以使葡萄糖完全转化为葡萄糖酸。 2. 添加试剂 向样品中加入适量的辅酶NAD+和氧化酶，使其与葡萄糖酸反应生成NADH。 3. 反应控制 根据实验要求，可以控制反应的温度、 pH 值等条件，以提高反应效率和准确性。 4. 测定吸光度 利用光度法或其他适用的方法，测定反应体系中产生的NADH的吸光度，通过标准曲线或计算公式，推算出样品中葡萄糖的浓度。 四、应用与优势 氧化酶法测定葡萄糖的原理基于酶的催化作用，具有以下优势： 1. 高灵敏度：由于酶的催化作用，可以极大地提高反应速率，使测定结果更加灵敏。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 ．/L 磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml 中，用1mol/L 氢氧化钠调pH 至，用蒸馏水定容至1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1
200U ，葡萄糖氧化酶1 200U ，4- 氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。3 ．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1 个月。 5 ．12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L 。 6 ．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。2h 以后方可使用。 7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 操作步骤
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围空腹血清葡萄糖为～/L 。 临床意义 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。